Как сделать споровый отпечаток
Приготовление взвеси из спор
Главное
Грибы выращивать просто! Если соблюдать некоторые правила:
1. Не нужно постоянно лазить в гроубокс и смотреть, как там поживают будущие грибочки, можно заглядывать раз в 2-3 дня не чаще. Это сложно, особенно в первый гров, но нужно быть терпеливыми.
2. Стерильность это наше-ваше все, причем на всех этапах, даже когда уже собрано несколько волн грибов и мицелий представляет собой монолитный кусок.
Общий порядок действий (кратко)
1. Делаем заранее споровую взвесь в шприце, из расчета половины принта диаметром 3-4 см. на 10 куб воды. Выдерживаем 1-2 дня в темном теплом месте для активации спор.
2. Замачиваем субстрат (овес не шелушенный, пшеницу или др.) в холодной воде на 12-24 часа.
3. Варим субстрат в течение 20-40 минут (пшеницу варим до момента, когда разваренных зерен будет 3-5% от всех).
4. При варке добавляем пол таблетки Левомицетина на 0.5 кг сухого субстрата. Если добавить больше, то мицелий будет расти угнетенно, меньше, толку не будет.
5. Даем хорошо стечь на большом дуршлаге, выкладываем на полотенце или ткань для сушки на 10-20 минут.
6. Рассыпаем субстрат по банкам. На дно банок насыпаем 1-1.5 см вермикулита. Закрываем крышками с фильтрами. Закрываем крышки фольгой, чтобы не попадала вода при стерилизации.
7. Стерилизуем банки в скороварке 1 час или 1-30 в обычной кастрюле. Даем остыть естественным путем, через 12-24 часа повторяем процедуру.
8. За час до инокуляции банок спорами добавляем в шприц 1 куб Гентамицина на 10 куб споровой взвеси.
9. Заражаем (инокулируем) банки спорами и отправляем их на обрастание в гроубокс.
10. Через, как правило, 12-14 дней, когда банки зарастут мицелием полностью, кейсим их, т.е. переклываем субстрат в контейнеры, покрываем покровным слоем и убираем на 7 дней обратно в гроубокс или в темное теплое место.
11. После этого контейнеры переносим в парник и начинаем стимуляцию плодоношения.
12. Собираем первую волну, сушим.
13. Отправляем кейсы на регидрацию в холодильник на 24 часа.
14. Собираем второю волну.
15. Делаем принты начиная со второй волны.
16. И т.д. пока кейсы будут плодоносить, как правило, удается снять до 8 волн.
Список того, что нужно (из расчета 4-6 циклов выращивания)
Ø Принт со спорами
Ø Раствор для инфузий NaCl 0,9% (можно использовать кипяченую воду) для приготовления взвести из спор
Ø Левометицин – 2 пачки
Ø Гентамицин в ампулах – 2 пачки
Ø Крышки для банок 8-10 шт.
Ø Субстрат (оптимально пшеница или овес не шелушенный) 900 гр. для 8 банок
Ø Вермикулит – 4 пакета
Ø Ящик для вещей не прозрачный объемом 60-90 литров для изготовления гроубокса
Ø Ящик для вещей, для изготовления парника. Можно тоже не прозрачный для конспирации ;э)
Ø Обогреватель аквариумный с терморегулятором 50-100 Вт. (например: Aquael 50 Вт.)
Ø Сетка металлическая для изготовления полки-второго дна для гроубокса и полки для парника – 1м*1м
Ø Лампа диодная – 5-10 Вт. с цветовой температурой от 5000 до 7000 Кельвинов
Ø Оргстекло для люка лампы – 1 шт.
Ø Уплотнитель дверной\оконный для уплотнения крышки парника – 2-3 м.
Ø Компрессор аквариумный 60-90 литров\ч
Ø Автоматические розетки для автоматизации освещения и вентиляции (например, как в Ikea см. фото в разделе про парник)
Ø Пищевые лотки объемом 1.4-2 литра – 6-8 шт.
Ø Пищевая толстая фольга для оборачивания лотков и банок – 1 рулон.
Приготовление взвеси из спор
Понадобиться:
1. Марлевая повязка
3. Перекись водорода\спирт
8. Раствор для инфузий NaCl 0,9% или обычная кипяченная вода
Перед операцией закрываем все окна и двери, сильно пропшикиваем помещение пульверизатором у потолка и делаем все в перчатках и в марлевой повязке.
Все операции проводим над огнем! Лучший вариант над раскаленной плитой, между приоткрытой включенной духовкой и задними конфорками, т.е. на поверхности ближних конфорок.
Как я уже и говорила, прошёл месяц. Заказ был сделан 26 ноября 2007, 17 декабря пришли споры. Ещё понадобилось какое-то время, чтобы морально подготовиться к этому важному событию и заучить наизусть последовательность действий.
Ночь с субботы на воскресенье 22 декабря 2007 года. Кухня квартиры, где живут мои родители. Место самое неподходящее для такого действия, но ничего не поделаешь, другого места у меня нет. К счастью, никто так и не вышел на кухню, мне повезло, и весь процесс остался незамеченым. Часа 3 ночи, все спят.
Передо мной на столе лежат:
-стерильный споровый отпечаток
-баян на 10 кубов с 8 кубами кипячёной дистиллированной воды (перед этим пару раз набрала и дала постоять в нём кипячёной воде)
-бутылка горилки (так как спирт нигде не нашла)
-хирургическая маска и перчатки
-бумажные салфетки
-чистая рюмка
-дезинфектор для холодильников (био-спирт)
Всё это было куплено или найдено заранее.
Включила духовку прогреваться, а также все 4 газовые комфорки на плите. Стало жарко. Крыжка духовки открывается не до горизонтального положения, а под очень большим углом и при этом предательски скрепит, поэтому было решено выдвинуть немного противень, который лежал внутри духовки и делать всё на нём.
Разбрызгиваю для начала дезинфектор, протираю им поверхности, а также рабочую поверхность горилкой. Из-за тёплого воздуха все микробы должны улететь вверх.
Наконец всё готово, помещение более-менее стерильно. Надеваю хирургическую маску и перчатки. Такое ощущение, что я делаю сложную хирургическую операцию.
Достаю из зиплока за край споровый отпечаток и чуть не роняю. Прокаливаю иглу баяна на газу и смачиваю в пропитанной горилкой салфетке. До этого чуть ранее протёрла рюмку горилкой. Рюмка стоит на противине. Пока прокаливала иглу, рюмка высыхает. Или не высыхает. Должна высохнуть, но я в этот момент ничего не соображаю. Всё происходит как в тумане.
И вот наконец начинаю соскабливать споры с отпечатка иглой шприца в рюмку. Точно не знала, сколько надо соскребать, но получилось где-то 1,5*2 см. По-моему этого было мало, не знаю. Вся процедура соскребания заняла у меня около минуты, я старалась торопиться, чтобы споры не заразились, и соскребать тщательно, чтобы было побольше спор.
Наконец, я убираю отпечаток обратно в зиплок, впрыскиваю примерно половину воды из баяна в рюмку, перемешиваю то что в рюмке и вбираю обратно в шприц. Но в рюмке ещё остаётся много спор. Тогда я повторяю эту операцию. Теперь практически все споры находятся в баяне.
Снова прокаливаю иглу, обрабатываю горилкой, надеваю колпачёк.
Запихиваю шприц со спорами в зиплок и убираю.
А, да, перед тем как убрать устроила небольшую фотосессию:)
Всё, можно спокойно идти спать.
Приготовление спорового отпечатка
Процедура изготовления спорового отпечатка сводится к следующему: Стерильный кусочек плотной бумаги (или чего-либо подобного), размером чуть больше шляпки гриба, укладывают в стерильную чашку Петри, затем берут гриб, используя стерильные ножницы (или скальпель) отрезают у него шляпку как можно ближе к спороносному слою (гименофору), и укладывают шляпку на бумагу спороносным слоем вниз. Затем чашку Петри закрывают, и убирают ее на сутки, куда-нибудь в темное место. За сутки, (ждать дольше не имеет особого смысла, т.к. созревшие споры, как правило, успевают высыпаться за это время, а новые споры гриб уже не производит) миллионы спор высыпаются из отрезанной шляпки образуя на бумаге пятно темно-фиолетового цвета (споровый отпечаток).
Цвет спорового отпечатка, всегда одинаковый для каждого вида грибов, и является важным признаком при его определении.
После того как споры высыпались, чашку Петри открывают, извлекают из нее шляпку гриба, а кусочек бумаги со споровым отпечатком, стерильным пинцетом помещают в подходящий по размеру, стерильный пакетик с застежкой (зип-локом) для его хранения.
Все операции по переносу спорового отпечатка из чашки Петри в пакетик, также, необходимо проводить в стерильных условиях.
Чтобы обеспечить стерильность пакетика, его необходимо протереть спиртом изнутри и снаружи, и позволить спирту испариться (если этого не сделать, остаткам спирта будет некуда деться в закрытом пакетике, и часть спор может погибнуть из-за контакта со спиртом). Стерильность чашки Петри, также достигается путем протирания ее спиртом, изнутри и снаружи. А кусочки бумаги, которые будут использоваться для приготовления отпечатка, удобнее всего стерилизовать в скороварке (или кастрюле), предварительно нарезав и поместив их в банку с закручивающейся крышкой. Стерилизацию проводят в течении 30-60 мин., после чего позволяют банке остыть до комнатной температуры. Стерильные кусочки бумаги, извлекают из банки стерильным пинцетом, непосредственно перед тем, как их использовать. Все инструменты перед проведением работ, также следует обрабатывать спиртом.
Вместо чашки Петри, можно использовать невысокую банку с закручивающейся крышкой. В этом случае, не следует герметично закрывать крышку – от этого, в банке создается повышенная влажность, в результате которой, споры прилипают к спороносным пластинкам и практически не высыпаются, или высыпаются очень плохо, образуя крайне бледные отпечатки.
Для приготовления отпечатка также, можно воспользоваться и «классической» технологией, используя вместо чашки Петри (или банки с закручивающейся крышкой) блюдце и рюмку. Но в этом случае, слишком велика вероятность нарушения стерильности отпечатка, из-за того, что уровень рюмки находится на одном уровне с бумагой, на которую высыпаются споры. К тому же, рюмка на блюдце – конструкция довольно неустойчивая, и во время переноса с места на место, рюмка очень часто сдвигается, или падает.
Итак, из вашего чудо туба вылезло долгожданное полкило, что дальше?
Момент, на котором гриб готов к сбору, для каждого различен. Если нужны принты, то естественно нужно ждать раскрытия шляп. Если принты не нужны собирать можно нераскрывшиеся. Кто был в голлашке, заметили, что свежие кубы там продают в состоянии с нераскрывшейся шляпой. Я обычно собираю тогда, когда вуаль еще не разорвалась, во-первых это снижает количество полученных грибов (да, да бывает и такое), во-вторых потенция таких грибов чуть больше, чем у грибов с открывшейся шляпой.
Во время начального пиннинга образуются примордии для обеспечения первых двух волн, поэтому полностью почистить блок, равносильно, для рачительного грибовода, удару себе серпом по яйкам.
Эксперементальный блок с абортами
А что если не чистить блок вообще? Не ну правда, уборка урожая тратит время и силы, а завтра еще вставать рано может ну его, а?
Сказано-сделано. Прет вторая волна, неубранные аборты деградируют, темнея, синея и
теряя свежесть. Многие из них опушаются у ножек. Многие поглощаются мицелием,
пушащимся снизу ног грибов второй волны. Снимаю вторую волну. Маленькие аборты первой волны к этому времени выглядят совсем не бодро. Их маленькие тела скукожываются и начинают сгибаться под собственным весом. Несмотря не не бодрый вид, никакой контаминации не наблюдается и принимается решение регидрировать блок перед третьей волной в том же виде как он есть, не почищая. Блок окончательно переходит в категорию экспериментальных.
После 6 часов регидрации блок вынимается из туба, и отправляется в выжиматель на подставку. Все что из него торчит выглядит стремно, размокшие отмирающие аборты местами похожи на куски серой слизи прилипшие к субстрату. 3-4 дня блок тупит, и ничего не происходит, на 5й день он начинает слегка пушиться мицелием. Пух нарастает на абортах тоже, хотя и не съедает их полностью, местами начинают лезть новые пины их пока не много, но по их виду можно понять, что они выйдут крупными.
Всего блок прожил 5 волн, и был выкинут, но не потому что контаминировал, а потому что сильно уменьшился в размерах и пересох.
Мораль этой истории такова, что если вы растите не на чистом зерне сильно блок можно не подчищать. Единственный момент, что после второй волны блок переезжает в пространство без стенок, в пакет, а потому, влага имеет возможность испаряться со всей поверхности блока. Те аэрация присутствует одинаково со всех его сторон. Если оставить блок в контейнере после 2й волны, можно получить загнивание абортов по краям и внизу контейнера.
Снятие, сушка и хранение
Когда я был еще новичком в грибоводстве, я сушил свой скудный урожай всякими усложненными способами закрытые боксы с осушителями, прокаленным рисом и прочим. В какой-то момент я понял абсурдность всех этих затей и купил себе многоярусную электросушилку. Отдал за нее 1200 рубасов и забыл про весь гиммор. Сушу в режиме 30С с обдувом встроенным вентилятором. Сушка протекает около 24-30
Для хранения я не использую холодильник, не вижу в этом смысла. Нет, ну серьезно, если у вас много грибов, нет смысла морочаться на тему того, что из них что-то там пропадет в небольшом количестве.
Не надеясь на их работоспособность, я растер их, вточил запив водичкой и пошел в Ашан купить что-нибудь на завтрак. Было чудное солнечное утро. Одев очечки потемнее я топал к магазу. Почти дойдя до пункта назначения, я начал ощущать знакомые шевеления восприятия. Оценив их, как незначительные, я вошел в Ашан и, взяв тележку для продуктов, стал лазить по рядам. В какой-то момент я ощутил, что потащило меня очень неслабо. В отделе сыров я понял, что забрало меня не по-детски: прилавки дышали, а надписи на ценниках никак не собирались в читаемые. Самого меня прилично штормило, и люди от меня стали шарахаться.
Оценив ситуацию, я понял, что тележка с продуктами мне больше нафиг не нужна, и одна только мысль о том, что мне придется стоять в очереди на кассу и расплачиваться с кассиром казалась мне нереальной затеей.
В ушах появился нарастающий гул, в котором можно было разобрать десятки разных голосов, но было ощущение того, что все они говорят на разных, непонятных мне языках. Атмосфера начала давить, людские массы огибаюшие меня со своими тележками и корзинами сливались в один потребительский поток, невероятно толстая тетя заорала справа от меня, но такое чувство что прямо мне в ухо: «Возьми-ка Кока Колы!» Слева от меня еще более громадный дядя, судя по всему ее муж, с остервенением начал загружать в свою тележку 2 упаковки колы по 6-ть 2-литровых бутылок. В один момент мне стало душно, я прикинул сколько это семейство пьет этой гадости, понял откуда весь их жир. Мне стало противно, в один момент мне в нос ударил удушливый запах пота, доносящийся от толстого мужика с Кока Колой. К горлу поступил ком, и меня затошнило.
«Надо валить отсюда» – пронеслось в голове. Резко сорвавшись с места, я двинул к выходу, сдерживая рвотные позывы. Я рвал из Ашана, как праведник-натурал рвал бы из Садома и Гаморы.
Вырвавшись на улицу я сделал несколько цикл глубоких вдохов-выдохов, заметил что тошнота отступила. В этот момент я оценил глубину трипа, я смотрел на плитку которой выложена территория перед торговым центром и не мог уцепиться вниманием ни за
Я развернулся и пошел прочь от этого места. По дороге я завис на лавочке одной из малолюдных алеек.
Снятие спорового отпечатка
Сейчас я понимаю, что принт помимо того, что должен содержать споры, должен быть еще чистым, грамотно снятым, удобным для извлечения с него спор, с умом запакованным и обязательно подписанным.
Для снятия отпечатков я использую фольгу для гриля, она толстая, крепкая, с ней удобно работать как до снятия принтов, так и при извлечении спор для своих нужд.
и для снятия одного-двух отпечатков.
1. Из толстой фольги вырезаете полосу, шириной примерно на 3 см больше диаметра шляпки гриба, а длиной как две ширины. Те для шляпки гриба диаметром 5 см размер прямоугольника фольги будет 8х16 см.
2. Готовим емкость с крышкой. Я использую емкость как от монотуба. У нее есть крышка и ее площадь достаточна для снятия достаточного количества отпечатков. Емкость протереть спиртом изнутри.
3. Ватным тампоном на гладкой поверхности протираем с обоих сторон полосы фольги. Протирать надо с нажимом, чтоб тщательно разгладить полоски фольги, они должны быть идеально ровные.
4. На внутреннюю часть перевернутой крышки разложить полоски фольги, еще раз протереть их спиртом и накрыть емкостью.
5. Снимите выбранный гриб с субстранного блока, уприте шляпку в чистую поверхность. Протертой спиртом бритвой (я использую бритвы типа рапира, как для советских бритвенных станков) аккуратно срежте ножку под самой шляпкой, так чтоб оставшийся «пенек» не выступал за уровень краев шляпки если ее положить спороносными пластинами вниз.
6. Чистым пинцетом аккуратно возьмите шляпку и положите ее на одну из подготовленных полосок фольги, так чтоб она занимала примерно середину половины полоски. Идея в том, что полоска будет сложена вдвое, и по центру одной из частей будет распологаться принт.
7. Повторите с другими шляпками.
8. Теперь, когда все шляпки разложены на полосках фольги, спрысните слегка из пуливелизатора ёмкость, которой накроете все это. Накройте и забудьте на 12 часов.
Вопрос, зачем прыскать емкость водой? Все очень просто. Я думаю, многие сталкивались с тем, что с отличных грибов получаются жидкие отпечатки или же они вообще не сыпят споры на носитель. Происходит это потому, что сыпать споры гриб может только при достаточной влажности. Как только гриб теряет связь с блоком, а шляпка теряет связь с ножкой, шляпка становится очень предрасположена к высыханию. Помните о том, что колонии мицелия образующие плодовое тело являются живыми и для «работы» им нужна повышенная влажность. Попробуйте и убедитесь в том, что при спороношении на носитель, увлажнение воздуха серьезно повышает эффективность процесса. Те кто видели мои принты, смогут подтвердить, что принты даже с небольших шляпок очень жирные. И могут быть использованы многократно.
9. Когда время прошло, приготовьте иголочку, протертую спиртом и откройте емкость.
Глава: Снятие спорового отпечатка
10. Подцепляя иголочкой край шляпки аккуратно подкиньте ее так чтоб она улетела с фольги не смазав принт.
11. Проделав это со всеми шляпками, закройте емкость и дайте принтам подсохнуть минут 10.
Это делается для того, чтобы остаточная влага не стала причиной порчи принта при хранении (там может даже вырасти слизь).
12. Сложите полоску фольги пополам по широкой стороне, прогладьте пальцем сгиб
13. Загните на одну сторону края полоски по сторонам, которые до складывания пополам были длинными на 0.5 см. Прогладьте сгибы
14. Загните на другую сторону оставшийся незапечатанным край.
15. Принт готов, осталось убрать его на хранение в такую же полоску фольги, но большего калибра и подписать.
Как наверное бросается в глаза, полученные таким способом отпечатки не являются стерильными, они являются просто полученными в относительно чистых условиях. При переносе в шприц для инокуляции зерна я использую гентамицин 1мл на 10мл воды. Этого достаточно для того, чтоб не было косяков. При инокуляции агара, естественно шансы занести ненужную бяку повышаются, но там совсем другой принцип работы. Культура переносится чистыми кусочками размером с рисовое зернышко, и в самом начале роста. Стандартная выбраковка чашек в прямых руках обычно не превышает 15%. Скажу еще, что получить стерильные отпечатки целый гимморой, и технически это сложно. А еще сложнее сохранить их стерильность при хранении.
Зашел тут на олечке разговор за принты на бумаге. Мол, не нравится мне фольга, хочу принты на бумаге. Как ее стерилизовать?
Я ответил: «утюгом блеа!» – смешно, не спорю. Но тем не менее, метод обкатанный. Правда, оставленный в прошлом, так как на бумагу давно не снимал. Итак, делаем стерильную бумагу для принтов.
Берешь лист обычный из принтера. Нарезаешь его под отпечатки. Потом берешь еще 2 листа и склеиваешь их по краям тонким скотчем. Кладешь внутрь получившейся «папки» нарезанную бумагу для принтов. Заклеиваешь точно так же скотчем. Получается почти герметичный конверт.
Потом кладешь на ровную твердую поверхность и хуячишь на максимуме утюгом с попутным пропариванием струей пара. Пара минут и стерильная бумага под принты готова.
Глава: Снятие спорового отпечатка
Любой грибовод со стажем скажет вам, что за свою жизнь выкинул много киллограммов зерна и прочих субстратов. Это нормально, и не стоит по этому поводу расстраиваться и опускать руки. Даже у супер махровых грибоводов проеб в 10-15% является нормой. Все зависит от потенциальной сложности и рисковости операции. Самый большой процент факапа стоит за такими операциями как g2g (инокуляция зерна на зерно) и агаровые трансферы.
Процент потерь тем больше, чем более масштабны объемы вашего хобби. Большие объемы субстрата требуют перемены подхода к грову, одно дело вы работаете с субстратом большой ложкой протертой спиртом, и совсем другое дело, когда у вас в руках садовые вилы или совковая лопата. Объем потенциальных претендентов на поедание пары кубов вашего чудесного компоста естесственно будет выше. А процесс создания условий для пастеризации таких объемов субстрата будет сложнее.
Но вернемся к небольшим объемам. Хорошая новость в том, что тут можно добиться практически полного отсутствия проблем с конкурентными организмами. Другая новость, для этого придется применять актуальные технические решения, в том числе описанные в этой книге.
Необходимо так же очень хорошо и полной грудью вкурить в жизнь грибов. Нужно пробовать поставить себя на место грибов. Понять, как они растут, питаются, размножаются и как все это вяжется с условиями их обитания.
Стерильность того же зерна в банке не является абсолютной величиной. Со временем она падает, какая бы хорошая барьерная защита не стояла. Хорошая новость в том, что банки с защитой описанной в этой книге позволяют держать напор контаминатов, как минимум 8 недель (если только зараза не была внесена в банку самим оператором).
Скорость размножения у конкурентов поистине велика, те, кто уже имел неудачные опыты, по достоинству оценили то, как бодро колонизирует банку триходерма или ниггер. Эх, такие бы показатели скорости кубам.
На примере триходермы становится понятно, что правы были полководцы, говоря: «Знай своего врага». Имея представление о конкурентах, легче с ними бороться.
В природе триходерма является почвенной бактерией, а соответственно занести ее с покровным слоем содержащим землю очень просто. При недостаточной стерилизации кейсинга шансы завести себе нового «друга» очень велики. Если в субстрат добавлен буффер с основной реакцией, например гипс, это естественным образом препятствует появлению триходермы (в разумных пределах, конечно же).
При первых же признаках появления триходермы не без сожаления выкидывайте кейк, а то пространство в котором он стоял, подвергайте тщательнейшему санированию с применением самых жестких методов. Доместос в помощь! Никогда не ждите пока она размножится, выкидывайте СРАЗУ! Этот вид производит множество очень мелких и живучих спор. Однажды поплодоносив в вашем парнике, она может стать причиной длинной полосы разочарований от заражения ею. Если вы все еще используете парник с керамзитом или перлитом, то либо замените их на новые, либо замочите старый в растворе доместоса или иной хлорсодержащей жидкости.
Если вы используете парники или монотубы с фильтрами, все это тоже обработать хлоркой, а фильтры обязательно замените на новые.
Никогда не открывайте банки пораженные триходермой там где происходит гров. Для утилизации пораженного зерна сначала приоткройте банку и залейте ее горячей водой, только после этого можно начинать вытряхивать ее в унитаз. Это же правило распространяется на любую зараженную банку. Спороносящие организмы распростроняются главным образом по воздуху, заливая банку водой, вы осаживаете споры и они не разлетаются по ванной или туалету. Естественно небольшая их часть один
фиг вылетает, поэтому старайтесь быть при вытряхивании по минимуму одеты (споры цепляются на одежду в большом количестве), а сразу после удаления банки вымойте руки по локоть антибактериальным мылом.
Анаэробные условия для контаминантов
Во многих руководствах и постах пользователей можно встретить упоминания о том, что во время колонизации грибам практически не нужен свежий воздух. Это не совсем так, и есть огромная разница, между повышенным содержанием углекислого газа и отсутствием кислорода.
Для понимания этой разницы нужно попробовать поставить себя на место грибов. Большинство любимых нами грибов проводит свой жизненный цикл в верхних слоях плодородного слоя земли. Обычно глубина их обитания это примерно до 15 сантиметров вглубь. Все что глубже не имеет необходимых условий для их роста.
В зависимости от компонентов образующих плодородный слой почвы его аэрация будет различной, и естественно будет ухудшаться с увеличением глубины.
Условием для плодоношения кубенсиса является появление постоянного воздухообмена.
Под постоянным воздухообменом я понимаю организацию одновременного притока кислорода и отвода углекислого газа. Для стадии колонизации организация оттока углекислого газа не нужна, а вот приток кислорода необходим. Теперь, надеюсь, разница понятна. Т. к. углекислый газ тяжелее воздуха, он стелется по поверхности субстрата, и остается в банке или контейнере, даже если отверстие воздушного фильтра будет большим, поэтому не страшно, если дырка для вентиляции банки будет хоть 3 сантиметра в диаметре, страшно если она будет меньше 8мм. Естественно, чем больший объем субстрата используется, тем больше ему требуется кислорода. И если речь идет о контейнере на 3 литра, то одним отверстием в 8мм как в крышке банки, не обойтись. Помимо того, что воздух нужен грибам для роста, он нужен так же для предотвращения создания анаэробных условий, при которых развитие патогенной микрофлоры будет вопросом короткого промежутка времени.
Особенно актуален и критичен вопрос притока кислорода при колонизации, при использовании синтетических субстратов на основе кокосового волокна. Т. к. фракция его довольно мелкая, а способность удерживать воду высока, для обеспечения достаточной аэрации слой субстрата не должен быть толще 15 см (лучше и того меньше), а вентиляционные отдушины достаточного размера. Естественно, инкубация должна проходить там, где воздухообмен свободный, иначе от отдушин не будет толку.
Отсутствие анаэробных зон в субстрате является одним из важных факторов, которые частично решают проблемы контаминации многими видами бяк.
Mokki7.12.2007, 21:09
Добрый вечер, Владимир
Цитата(Vladimir @ 15.9.2004, 18:43)
Вам требуется разъяснение деталей получения мицелия из спор? С уважением, Владимир.
С уважением, Дмитрий.
Vladimir10.12.2007, 15:46
Цитата(Mokki @ 7.12.2007, 21:09)
Хотелось бы услышать, для сравнения со своим «босяцким» методом.
Здравствуйте, Дмитрий!
Полно, Вам принижать свои познания и возможности, ведь уже с самого начала был понятен уровень Вашей компетенции.
А, используемый Вами метод, вполне приемлем для скрещивания и селекции.
Если бы мне пришлось ответить Сергею «Труженику», то вряд ли я стал углубляться в объяснения более того, что мы с Вами уже обсудили в теме «Селекция грибов».
С уважением, Владимир.
Mokki10.12.2007, 19:16
Цитата(Vladimir @ 10.12.2007, 14:46)
Полно, Вам.
Mokki30.12.2007, 16:30
Интересно, а какова будет всхожесть спор, если они полежат года два, три и если им перед инокуляцией, дать полежать в воде пару суток, для набухания?
Где-то в сети читал, что реанимировали какой-то штамм гриба, из отпечатка 10ти летней давности!
Vladimir31.12.2007, 9:43
На мой взгляд, споры для того и существуют, чтобы дать организму время для поиска удачного места колонизации питательной среды.
Длительное воздействие отрицательных температур также сокращает время хранения, потому что постепенно ведет к денатурации составных элементов споры.
Цитата(Vladimir @ 31.12.2007, 8:43)
Вспомните, про вирусы и прочую мелкую флору, они ведь тоже хочут есть.
Цитата(Vladimir @ 31.12.2007, 8:43)
Так что, учитывая эти условия можно через некоторое время ответить на поставленный Вами вопрос, только, пожалуйста, не забудьте сообщить нам о результате исследований
Vladimir31.12.2007, 18:30
Если, это точно, и если споры будут прорастать через пару лет, это очень хорошо, это очень удобно! Взял лок пакетик, положил туда стерильный отпечаток, не пыль не попадёт, не влага и всё это дело, в какую ни будь книжку и на полку, и не надо мучится с мицелием.
Цитата(Mokki @ 31.12.2007, 14:04)
Вот именно их, я и помню. Про всех «спороносов» нам говорили, что и сто лет могут лежать и более, и быть живыми, а в сети на всех сайтах читаю, что полгода хранения грибных спор и всё, прорастания не будет, а потом советуют вместо спор хранить, субстратный мицелий в холодильнике.
Mokki1.1.2008, 14:48
Я даже представить не мог, что с мицелием можно ещё и мучиться.
Не совсем верно Вы меня поняли. Проще же сохранять культуру всю свою жизнь в «конверте», чем иметь всю свою жизнь в комнате и холодильнике, окружение различных баночек и скляночек, это и не красиво и более трудоёмко, а другого помещения у меня нет. Сорт для меня не важен, важна культура, а нужный штамм для себя, подберу из мультиспоры.
Цитата(Vladimir @ 31.12.2007, 17:30)
Таким образом, можно предположить, что одноядерные споры предназначены для долгих странствий в атмосфере в поисках лучшей жизни, а двуядерные споры не имеют такой приспособленности к консервации «(условно)жизненной энергии», но зато имеют значительный энергетический запас для активного стартового роста в питательной среде.
Конечно, всё это лишь гипотеза, которую лучше бы проверить экспериментально.
Vladimir2.1.2008, 12:07
Здравствуйте, Дмитрий!
Да, этот отрывок текста бесспорно интересен и особенно тем, что автор попытался осветить вопрос с нескольких точек зрения сразу.
Но недостатком этого текста, по моему мнению, является невнятное формирование мысли в целом и нечеткое разграничение этой мысли по заложенным в текст вопросам.
Из первых двух предложений совершенно непонятно – определился ли сам автор с тем, что он вкладывает в понятие «репродуктивное размножение».
Из первого предложения четко видно, что автор связывает это понятие с половым процессом, а понятие «вегетативное размножение» связывает с бесполым процессом.
Остаётся непонятно, почему автор далее пишет о репродуктивной стадии, как о неполовом процессе?
При этом, почему то, не обозначен тот факт, что в реальности половой процесс идет параллельно с вегетативным развитием мицелия и выделить его в отдельную фазу жизненного цикла мицелия не представляется возможным.
В этом смысле, даже вегетативную стадию развития мицелия, нельзя считать бесполой, хотя сам половой процесс в этой стадии действительно можно условно обозначить, как несовершённый (незаконченный). Окончание полового процесса можно условно обозначить в генеративной фазе развития мицелия – при появлении плодового тела гриба и образовании спор.
Поэтому корректно было бы считать, что репродуктивных стадий в общем цикле развития мицелия высших грибов две:
1. При образовании спор;
2. При образовании двуядерного мицелия от слияния мицелия одноядерного разной полярности.
И хоть в тексте нет слова о базидиальных грибах, но в целом Вы действительно, нашли убедительное подтверждение гипотезы о том, что и споры грибов могут иметь различную функциональную специализацию, а поэтому и различные сроки сохранности.
С уважением, Владимир.
Mokki3.1.2008, 19:06
Здравствуйте, Владимир!
Цитата(Mokki @ 1.1.2008, 13:48)
Из вышесказанного я сделать вывод (может он ошибочный), что мы разговариваем сейчас про, оидии, которые долго не хранятся. И всё же, в тексте нет слова о базидиальных грибах.
С уважением, Дмитрий.
Vladimir4.1.2008, 10:49
Цитата(Mokki @ 3.1.2008, 19:06)
Нет, ошибочный вывод, на «базидиях» образуются не оидии:
Тогда базидиоспоры, это получается геммы, что ли?
Конечно, наука и служит таким познаниям, но жизнь коротка и поэтому давайте, же найдем вектор выхода нашей энергии, иначе мы начнем изучать всё и не добьемся при этом, ни чего конкретного.
Вектор, это направление к цели, достижение которой достойно приложенным к этому усилиям.
Можно, конечно радоваться и делать выводы от промежуточных результатов, но в этом случае появляется риск «скатиться» к примитивизму в выводах.
Имеется очень яркий пример такого примитивизма в методологии грибного производства. Достаточно вспомнить распространенные утверждения о том, что триходерма в природе, оказывается, представлена всего четырьмя штаммами, и вообще, получается, что любое инфицирование субстратов и компостов связано только с триходермой.
Можно ли успешно развивать производство грибов, вооружившись такими убеждениями?
На мой взгляд, это вопрос риторический.
С уважением, Владимир.
Mokki4.1.2008, 13:43
Здравствуйте, Владимир!
«Самое интересное для определения возраста Земли и даже времени появления грибов – так называемые «фоссильные споры». И вот почему они способны очень долго сохраняться. Там есть хитин, он сохраняется, и есть еще удивительный биополимер – спорополленин. Кстати сказать, этот спорополленин есть и у пыльцы растений. Химически спорополленин представляет собой молекулу каротина, из которой в результате окислительной полимеризации получается длинный полимер – этот вот спорополленин.
Почему сейчас этими двумя биополимерами очень интересуются? Они обладают удивительной способностью длительное время сохраняться. На них не действуют ферменты, которые содержаться в почве. Кроме того, они довольно хорошо переносят колебания температур. Самое интересное, что на них не действуют кислоты и щелочи, нужен озонолизис, чтобы растворить спорополленин. Короче говоря, его можно растворить только в «царской водке». А хитин не растворяется ни в воде, ни в органических растворителях. Нужны специальные растворители, очень сложные, чтобы растворить эту молекулу. И если поверхность какого-нибудь прибора, предположим, покрыть спорополленином, то это будет вечное покрытие. Вот из-за этих двух биополимеров споры грибов очень длительное время сохраняются в почве.
И когда начались эти работы, обнаружили резаморфы и эти споровые отпечатки обнаружили на растениях – это более 200 миллионов лет назад».
С уважением, Дмитрий.
Vladimir5.1.2008, 12:51
Добрый вечер, Дмитрий!
Тема биополимеров грибов, в будущем, ещё заявит о себе.
Хитины, уже сегодня используют в Японии для производства заменителя кожи человека.
Благодаря этому в Японии созданы методики спасения людей, получивших 90% ожоги.
Так же, из хитинов производят адсорбенты нового поколения, многократно превосходящие по свойствам активированный уголь.
Перечислять все области применения препаратов из хитина нет смысла, потому что в настоящее время, в качестве сырья, используются отходы в виде панциря ракообразных животных после океанического промысла. Отходы не имеют производственной составляющей себестоимости, и поэтому их использование всегда предпочтительнее (с точки зрения экономики производства) любого промышленного продукта. В результате промышленное получение хитина из грибов на современном этапе пока не актуально.
Но справедливости ради нужно сказать, что отдельные представители бизнеса России уже начали активно интересоваться хитинами грибов. В частности, на Российском конкурсе инновационных проектов в Саранске, ко мне подходил представитель венчурного капитала и задал несколько вопросов по данной тематике.
Цитата(Mokki @ 4.1.2008, 13:43)
. споровые отпечатки обнаружили на растениях – это более 200 миллионов лет назад».
Значит в людях еще скрыт огромный потенциал долгожительства
С уважением, Владимир.
Mokki5.1.2008, 13:04
Цитата(Vladimir @ 5.1.2008, 11:51)
Статья имела следующее название: «Грибы были предками людей». Каково?
А статья эта, ещё жива?
Vladimir5.1.2008, 21:31
Цитата(Mokki @ 5.1.2008, 13:04)
А статья эта, ещё жива?
В теме генетических модификаций я упоминал о студентах, которые влезли в программу моего компьютера. Windows пришлось менять. Много чего там погибло. Из этого всего, статейку меньше всего жаль.
Но что интересней всего, что буквально за пару недель до этого случая «полетела» материнская плата на домашнем буке и я его обменял в магазине на деньги, а в этом буке была дублированная информация.
Вот такая необъяснимая шутка природы.
SERGO8.7.2008, 14:02
Цитата
Недавно узнал что оказывается можно размножать не только агаровым отпечатком, но ещё и грибной споровой взвесью.
А как можно её получить, или где подробней есть тому описание подскажите пожалуйста.
Хоть и прошло уже кучу лет, но позволю себе ответить. Технологически это очень легко. Нужно иметь рюмку, шприц, споровый отпечаток, кипяченую воду, или жидкость которую используют для уколов. Вода в рюмке, соскребаем споры в жидкость, мешаем, втягиваем в шприц. Жидкость оставляем на 12 часов, для регидрации спор, все можно работать. Ну главное условие при проведении процедуры, это максимальная стерильность, вот и все. Но для работы с вешенкой лучше использовать клонирование. Покупаете в магазине гриб, в стерильных условиях вырезаете со средины ножки кусочек, мокаете в перекись, и пока все шыпит перекидываете на стерильное зерно. Я когда-то таким способом клонировал лесную грифолу.
Иногда для точной идентификации гриба необходимо узнать цвет спорового порошка. Почему мы говорим о «споровом порошке», а не о цвете спор? Одну спору невооруженным глазом не рассмотреть, но если они насыпались массово, порошком, то их видно.
В зарубежной литературе используется термин «spore print», короткий и ёмкий. Перевод получается длиннее: «отпечаток спорового порошка», слово «отпечаток» тут, возможно, не совсем корректно, но оно прижилось и используется.
Обратите внимание на цветную пыль, покрывающую листву, траву или землю под грибами — вот это оно и есть, споровый порошок.
Примеры, вот розоватый порошок на листе:
А вот белый порошок на листе под грибом:
Грибы, растущие близко друг к другу, обсыпают спорами шляпки своих низкорослых соседей.
Однако в природных условиях споровый порошок уносится ветром, смывается дождём, бывает затруднительно определить его цвет, если он насыпался на цветной лист или яркую шляпку. Приходится получать отпечаток спорового порошка в стационарных условиях.
Ничего сложного в этом нет! Вам потребуется:
Мыть гриб, выбранный для получения «spore print», не рекомендуется. Аккуратно отрежьте ножку, но не под самую шляпку, а так, чтобы можно было на этот обрезок поставить шляпку максимально близко к поверхности бумаги, но чтобы пластины (или губка) не касались поверхности. Если шляпка слишком большая, можно взять небольшой сегмент. Верхнюю шкурку можно смочить парой капель воды. Накрываем наш гриб стаканом, чтобы исключить сквозняки и преждевременное высыхание шляпки.
Оставляем на несколько часов, лучше — на ночь, при обычной комнатной температуре, ни в коем случае не в холодильнике.
Для навозника этот срок можно уменьшить, у них всё происходит слишком быстро.
Для относительно молодых грибов может потребоваться сутки и даже более.
В моём случае только через двое суток удались получить отпечаток такой интенсивности, что можно разобрать цвет. Качество получилось не очень, однако помогло чётко идентифицировать вид, порошок не розовый, значит, не энтолома.
Когда будете поднимать шляпку, будьте осторожны, не сдвиньте её, не смажьте картину: споры без движения воздуха падали вертикально вниз, так что мы увидим не только цвет порошка, но и рисунок пластинок или пор.
Вот, собственно, и всё. Мы получили отпечаток спорового порошка, можно фотографировать для определения или просто «на память». Не смущайтесь, если с первого раза не получилась красивая картинка. Главное — цвет спорового порошка — мы узнали. А остальное приходит с опытом.
Остался неоговоренным ещё один момент: какого цвета бумагу лучше использовать? Для светлого «spore print» (белый, сливочный, кремовый) логично использовать чёрную бумагу. Для тёмного, понятно, белую. Альтернативный и очень удобный вариант — делать отпечаток не на бумаге, а на стекле. Тогда, в зависимости от полученного результата, можно рассматривать отпечаток, меняя фон под стеклом.
Аналогичным образом можно получать «spore print» для аскомицетов («сумчатых» грибов). Следует учесть, что аксомицеты разбрасывают споры вокруг себя, а не вниз, так что накрываем их ёмкостью пошире.