4 часа

4 часа

5 часов

2 часа

4 часа

24 луночный планшет — 96, 168, 312 образцов за 2 часа

Постановка реакции цПЦР на примере QIAcuity Digital PCR System

А теперь давайте представим, что мы проводим реакцию цПЦР для интересующего нас образца. Что же нам потребуется?

Во-первых, инструменты. Как было рассказано в предыдущей главе, машины для цифровой ПЦР с каплями производят несколько компаний; базовый экспериментальный план почти одинаков для любой из них. Цифровая ПЦР-система на основе капель состоит из двух машин: одна генерирует капли, а другая считает количество положительных сигналов после амплификации. Также понадобится термоциклер для проведения самой ПЦР — в принципе, это может быть любой прибор подобного рода, в идеале, количественный. Таким образом, можно отслеживать реакцию в режиме реального времени, и если она по каким-то причинам не проходит, остановить ее и избежать дальнейшей ненужной работы по подсчету сигналов.

Во-вторых, реагенты. За исключением масла, образующего капли, все реагенты в основном такие же, как и в количественной ПЦР. То есть можно выбрать анализ на основе зонда или с использованием флуоресцентного красителя. Если нужно мультиплексировать образцы, стоит использовать зонды с разными красителями. Можно прибегнуть к хитрости и мультиплексировать образцы без зонда, сыграв на длине амплифицируемого фрагмента — более длинные ампликоны будут связывать больше флуоресцентного красителя и сильнее флуоресцировать.

При использовании больших матриц ДНК (геномной ДНК из свежих тканей/клеток) сначала стóит расщепить ДНК эндонуклеазами, так как геномная ДНК очень вязкая, и это может поставить под угрозу образование капель воды в масле (только нужно убедиться, что ферменты не разрезают область амплификации!). Геномная ДНК, выделенная из образцов парафиновых блоков (FFPE), не нуждается в этом этапе предварительной обработки, поскольку она уже фрагментирована из-за фиксации ткани.

Чтобы анализ был информативен, необходимо правильно разбавить образец. Для этого стоит заранее проверить динамический диапазон машины (минимальное и максимальное количество детектируемых копий шаблона в образце). Для справки: в 400 нг ДНК человека содержится примерно 120 000 копий гаплоидного генома. Таким образом, для оценки количества копий на образец можно использовать формулу:

m(g) = n × 1,096×10 –21 г/пн,

где n — размер генома в парах оснований, г/пн — масса одной пары оснований.

Три, два, один — начали!

Первым шагом в эксперименте с капельной цифровой ПЦР является смешивание реакционной смеси с маслом, загрузка ее в генератор капель и ожидание их появления под действием давления. В некоторых системах после этого может потребоваться перенос капель в планшет для ПЦР. Осторожнее с пипетированием: капли на этом этапе нестабильны.

Второй этап — термоциклирование, проводимое в условиях, указанных для интересующего гена. Поскольку капли неподвижны, скорость нормальной термической диффузии в воде снижается, а это означает, что капли могут нагреваться не одновременно. Чтобы преодолеть это, нужно установить скорость линейного изменения на 2,5 °С/с, чтобы позволить всем каплям достичь правильной температуры.

Финальный аккорд — детекция капель в считывателе. В нем капли сначала проходят контроль качества: те, что не соответствуют критериям размера и формы, исключаются из измерения. Каплям, содержащим ДНК-мишень и поэтому имеющим флуоресценцию, превышающую порог, присваивается значение 1; без матрицы (а значит, имеющим флуоресценцию ниже порогового значения) — 0. Программное обеспечение подсчитывает количество положительных (1) и отрицательных (0) капель и вычисляет точное количество копий ДНК-мишени. Общее количество капель, включенное в итоговое измерение, в конечном счете не важно, потому что результат рассчитывается по доле отрицательных капель.

Детекция результата может занять несколько часов. Полезно знать, что капли очень стабильны при ПЦР. Вы можете хранить их несколько дней в холодильнике, если у вас недостаточно времени, чтобы прочитать их в тот же день.

И самое главное: прежде чем начать, нужно четко определить, что искать.

Как бы великолепно ни звучала технология цифровой ПЦР, она не подходит для каждого ПЦР-эксперимента. Лучшее применение технологии — задачи из серии «найти иголку в стоге сена»: поиск редких аллельных мутаций, небольших кратных изменений в экспрессии генов (например, двукратных, которые не может обнаружить кПЦР) или небольшой разницы в количестве копий (скажем, между 10× и 11×). Эксперименты с высокой пропускной способностью и анализ больших изменений в экспрессии успешно проводятся с помощью традиционной ПЦР или ПЦР в реальном времени. В случаях же, когда точность и чувствительность имеют первостепенное значение, использование цифровой ПЦР оправдано. Надо помнить, что чувствительность повышается с количеством капель, поэтому при выборе системы важно соотнести параметр количества капель с тем, насколько чувствительным должно быть обнаружение.

Задачи для цПЦР

За последние годы цПЦР проникла чуть ли не во все сферы, где необходимо провести генетический анализ образца: она используется в науке, прикладной медицине, сельском и пищевом хозяйствах. Дальше мы расскажем о нескольких типичных задачах, которые можно элегантно решить при помощи цПЦР.

Применение цПЦР в научных исследованиях

Анализ экспрессии генов, единичных клеток и обнаружение редких последовательностей

цПЦР не требует создания стандартных кривых или нормализации по генам домашнего хозяйства, что делает ее идеальной для обнаружения и количественного определения слабо экспрессируемых генов, поиска редких последовательностей и анализа материала, взятого из отдельных клеток. Кроме того, цПЦР достаточно чувствительна, чтобы надежно обнаруживать едва уловимые изменения в экспрессии генов (до 2-кратных различий).

Если добавить предварительный этап обратной транскрипции (ОТ), цПЦР может количественно определять уровни не только ДНК, но и РНК практически со всеми преимуществами цифрового разделения. Особенно это интересно при обнаружении циркулирующих микроРНК (мкРНК), которые, как известно, могут быть биомаркерами рака, эндокринной дисфункции и других заболеваний. Показана возможность такого варианта цПЦР, если «вручную» выполнить обратную транскрипцию перед цПЦР в системе Bio-Rad QX100 [33]. ОТ-цПЦР имела на 37–86% более низкую вариабельность и в 7 раз лучшую воспроизводимость, чем ее аналог кПЦР, и такой же предел обнаружения. ОТ-цПЦР могла лучше различать образцы сыворотки крови с наличием или отсутствием miR-141 — маркера рака простаты. Аналогичными исследованиями удалось подтвердить микроРНК-биомаркеры плазмы крови для рака легких [34] и рака молочной железы [34].

Исследования экспрессии генов с помощью ОТ-цПЦР предлагают абсолютное количественное определение мРНК даже на уровне одной клетки. Альтернативы ОТ-цПЦР с более высокой пропускной способностью — новейшие методы секвенирования транскриптома одной клетки [38], [39].

Наконец, ОТ-цПЦР также применялась для вирусного мониторинга Pegivirus A — скрытого РНК-вируса, который может замедлять прогрессирование ВИЧ [40], [41]. После выделения тотальной клеточной РНК и обратной транскрипции применяли чип Fluidigm 48.770 для цПЦР, что существенно уточнило нижней предел обнаружения (до 3–10 копий/мкл) и повысило оценку точности вариабельности образца (11% по сравнению с 23% для кПЦР).

Количественная оценка библиотек для глубокого полногеномного секвенирования

NGS — так называемое секвенирование нового поколения — начинается с приготовления высококачественной библиотеки ДНК в точном количестве. Создание библиотеки NGS (например, для дальнейшего секвенирования на оборудовании Illumina) включает несколько этапов: фрагментацию образца, выбор размера фрагмента, восстановление концов, лигирование адаптера, обогащение методом ПЦР и количественный анализ. Из этих этапов цПЦР оказалась полезной для оценки целостности выбора размера, обогащения и количественного определения. Используя систему RainDance, исследователи количественно определяли распределение размеров и целостность фрагментов ДНК в своих библиотеках [42]. Они выполнили мультиплексную цПЦР с четырьмя зондами, каждый из которых гибридизовался с ДНК-фрагментами разной длины. При этом приблизительное распределение длин нуклеотидных последовательностей можно количественно определить в цифровом виде, подсчитав количества ампликонов, полученных из конкретного образца. Когда то же самое распределение анализируется с помощью количественной ПЦР, оно имеет коэффициент вариации примерно 10–50%.

Полногеномное секвенирование часто требует амплификации предварительно обозначенных локусов, обычно с помощью ПЦР с выбранной библиотекой праймеров. Разделение фрагментированной ДНК на небольшие ячейки эффективно обогащает ДНК-мишени по сравнению с фоном, тем самым улучшая амплификацию редких или трудно амплифицируемых последовательностей. Используя вариант системы RainDance, ученые амплифицировали почти 4000 мишеней одновременно, используя библиотеку праймеров с высоким мультиплексированием [45]. Сначала было создано и объединено несколько библиотек капель, содержащих каждую из пар праймеров. Затем капли библиотеки праймеров последовательно сливали с каплями, содержащими геномный образец. После ПЦР эмульсию капель разбивали, а амплифицированную ДНК обогащали и секвенировали с высокой специфичностью и чувствительностью.

Важный вариант применения цПЦР — количественный анализ библиотек для NGS. Для достижения высокопроизводительного и высококачественного полногеномного секвенирования требуется относительно узкий диапазон емкости загрузки ДНК (например, Illumina предлагает 60 гигабаз на дорожку секвенатора HiSeq 2500. Слишком малое количество ДНК приведет к плохому покрытию, низкой глубине считывания и невозможности обнаружить SNP или редкие последовательности. Слишком большое — к чрезмерной кластеризации, когда не все последовательности генома будут разрешены. Количественный анализ ДНК с помощью спектрофотометрии или флуоресценции является качественным и имеет ограниченную чувствительность, требуя более чем в 1000 раз больше образца, чем сам секвенатор. Получается, что драгоценный образец тратится фактически впустую. Используя чип Fluidigm dPCR с универсальными адаптерными праймерами, биологи провели абсолютный количественный анализ всего лишь 100 молекул матрицы и далее секвенировали библиотеки нанограммового, а не микрограммового масштаба [46].

В другой работе исследователи секвенировали 11 образцов с использованием платформы Illumina HiSeq 2500, а перед загрузкой определили количество ДНК с помощью обоих методов и после проведения эксперимента сравнили корреляцию начальных данных и результатов секвенирования, показав, что количественный анализ с помощью системы Raindance цПЦР более тесно коррелирует с выходом секвенирования по сравнению со рутинным исследованием на приборе Agilent Bioanalyzer, в котором для измерения концентрации используются капиллярный электрофорез и детекция флуоресценции (рис. 7). Похоже, благодаря отличным возможностям количественного анализа и амплификации, цПЦР быстро становится стандартным инструментом в NGS.

Рисунок 7. Количественный анализ библиотек для NGS: сравнение цПЦР с количественным определением методом капиллярного электрофореза. Образцы секвенировали на HiSeq 2500 с реагентами для секвенирования v4 SBS. Загрузка проточной кюветы основывалась на измерениях концентрации RainDrop. Синие столбцы представляют выход секвенирования в мегабазах, красная линия представляет загрузочную концентрацию, измеренную с помощью RainDrop, зеленая — загрузочную концентрацию, определенную Bioanalyzer (доступно только для 6 библиотек).

Применение цПЦР в лабораторной диагностике

Анализ числа копий (CNV)

Существуют генетические заболевания, обусловленные вариацией числа копий некоторых участков генома, в первую очередь, некоторых генов (CNV). Например, большое количество копий гена ERBB связано с агрессивными формами рака молочной железы [9]. Для некоторых вариантов CNV могут быть различия в сотне копий между людьми, однако в большинстве случаев различий намного меньше: около 10 [47].

По оценкам Международного проекта HapMap, CNV составляют примерно 12% генома человека и включают большую долю нуклеотидов, чем однонуклеотидные полиморфизмы (SNP). Как и в случае с SNP, консорциумы (например, проект CNV, координируемый Институтом Wellcome Trust Sanger) изучают CNV, чтобы исследовать ряд вопросов, включая влияние CNV на экспрессию генов, их роль в заболеваниях и эволюции человека, а также их полезность в картографировании родословных.

Различия в количестве копий конкретного сегмента ДНК могут быть как связаны, так и не связаны с обнаруживаемым изменением фенотипа: CNV чаще встречаются в некодирующих областях. Наличие CNV способствует генетической изменчивости среди особей внутри вида.

Например, меньшее количество копий гена хемокина CCL3L1 может сделать человека более восприимчивым к ВИЧ [48], а дополнительные копии гена EGFR могут привести к повышенному риску рака молочной железы [49]. Анализ CNV требует количественного определения соотношения ДНК-мишени по сравнению с эталоном. В первых отчетах об анализе CNV человека в 2004 г. использовалась сравнительная геномная гибридизация и микрочипы [50], [51], позже для этого начали использовать глубокое секвенирование и кПЦР.

Метод цПЦР обеспечивает бóльшую точность и чувствительность, чем другие методы ПЦР, и идеально подходит для количественного определения небольших различий в количестве копий генов. Таким образом, цПЦР можно использовать для количественной оценки и мониторинга мельчайших различий в CNV, которые могут объяснить разницу между здоровой и опухолевой тканями, а также служить маркерами агрессивности опухоли.

Преимущество цПЦР перед кПЦР заключается в ее способности разрешать небольшие различия в количестве копий. Там, где кПЦР может статистически разрешать двукратные различия (от нуля до двух копий [52]), а с повторностями в 1,25 раза (до четырех копий), один цикл цПЦР может разрешать до восьми копий. Увеличение количества ячеек до 1 миллиона и более улучшает разрешение до 1,1-кратных различий даже при низких концентрациях (λ

Источник

Как расшифровать пцр

Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Особенности

ПЦР — альтернатива клонированию для получения, в сущности, неограниченных количеств интересующей ДНК-последовательности. ПЦР за несколько часов может избирательно увеличить в количестве единственную молекулу ДНК до нескольких миллионов копий, что революционизировало как молекулярную диагностику, так и молекулярный анализ генетических болезней.

ПЦР — ферментативное «умножение» или амплификация фрагмента ДНК, расположенного между двумя олигонуклеотидами, так называемыми праймерами. Праймеры разрабатывают таким образом, что первый комплементарен одной нити молекулы ДНК с одной стороны целевой последовательности, а второй — другой нити противоположной стороны этой же последовательности.

Олигонуклеотидные праймеры таким образом фланкируют целевую последовательность, а их 3′-концы направлены к амплифицируемой последовательности. Затем, используя последовательность между праймерами как шаблон, с помощью ДНК-полимеразы синтезируются две новые нити ДНК. Вновь синтезированные комплементарные нити ДНК формируют следующую копию исходной целевой последовательности.

Регулярные циклы тепловой денатурации, гибридизации праймеров и ферментативного синтеза ДНК приводят к экспоненциальному росту (2, 4, 8,16, 32. ) числа копий целевой последовательности ДНК. В результате количество копий участка ДНК между праймерами будет увеличиваться до тех пор, пока не израсходуются субстраты реакции (праймеры и нуклеотиды). При использовании специально разработанных приборов для ПЦР цикл амплификации занимает всего несколько минут. Таким образом, в течение нескольких часов могут быть получены миллиарды копий стартовой молекулы ДНК.

ПЦР может генерировать достаточные для анализа мутаций количества специфических генов из образцов ДНК. Конкретные части генов (обычно экзоны) быстро амплифицируются с помощью специфичных праймеров. Амплифицированный сегмент затем может или быть легко секвенирован, или протестирован методом АСО-гибридизации для обнаружения мутации. Анализ ДНК, генерируемой в ходе ПЦР, может быть выполнен менее чем за один день, существенно облегчая разработку и клиническое использование большого числа диагностических ДНК-тестов.

ПЦР также можно использовать при анализе небольших количеств РНК, эта процедура называется амплификацией продуктов обратной транскрипции (RT-PCR). Сначала, с помощью того же фермента обратной транскриптазы, которую используют для изготовления библиотек клонов кДНК, на основе интересующей мРНК синтезируется однонитевая кДНК. Затем добавляют праймеры для ПЦР вместе с ДНК-полимеразой, так же как при ПЦР ДНК. Один из олигонуклеотидов запускает синтез второй нити кДНК, полученная двойная спираль затем служит в качестве объекта ПЦР.

ПЦР, по сравнению с любым другим методом анализа, чрезвычайно чувствительная, более быстрая, менее дорогая и нетребовательная к образцам пациентов методика. Она позволяет обнаружить, проанализировать и измерить специфические последовательности гена в образце ДНК пациента, не клонируя его и не прибегая к блоттингу.

Анализ можно выполнять даже из нескольких клеток буккального эпителия после полоскания рта, из единственной клетки, взятой у 3-дневного эмбриона, содержащего четыре или восемь клеток, из спермы во влагалищном тампоне, полученном от жертвы изнасилования, или из капли сухой крови на месте преступления. ПЦР, таким образом, устраняет необходимость в получении больших количеств ДНК или РНК из образцов ткани и становится стандартным методом анализа ДНК и РНК в клинической диагностике и криминалистике.

Количественная полимеразная цепная реакция (ПЦР)

ПЦР также можно выполнять как количественный анализ для измерения объема конкретной последовательности ДНК в образце. В начале ПЦР количество молекул амплифицируемой области ДНК с каждым циклом денатурации, гибридизации праймеров и синтеза ДНК увеличивается вдвое. Если построить график увеличения вещества, синтезированного в начале ПЦР, мы получим на полулогарифмическом графике прямую линию, показывающую, что объем продукта удваивается с каждым циклом.

Количество циклов, требуемых для достижения некоего произвольного порога, зависит от того, сколько шаблона первоначально присутствовало в начале ПЦР: чем меньше циклов необходимо для достижения данного порога, тем больше шаблона, по-видимому, присутствовало вначале. Эту технику, известную как ПЦР в реальном времени, наиболее часто используют для измерения небольших количеств одной конкретной ДНК или РНК в одном образце (образец А) относительно контрольного количества РНК или ДНК в другом образце (образец Б). Важно, чтобы эффективность амплификации образца А и образца Б были сравнимыми, т.е. два прямых сегмента на графике должны быть параллельными.

Видео методика и принципы ПЦР (полимеразной цепной реакции) в диагностике

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Источник

Как определить коронавирус или что такое анализ ПЦР?

На сегодняшний день количество стран и автономных территорий, где выявлен коронавирус, перешагнуло за 200. Во всём мире зарегистрировано уже более 95 миллионов случаев заражения SARS-CoV-2, а ежедневный прирост количества заболевших не позволяет говорить о снижении темпов распространённости инфекции.

Когда нужно делать анализ методом ПЦР и точно ли он покажет инфекцию? Данное лабораторное исследование на COVID-19 рекомендуется проходить всем лицам с признаками острых респираторных инфекций и тем, кто находится в группе риска. Полимеразная цепная реакция, как метод выявления нового коронавируса SARS-CoV-2 по фрагментам его генома в клиническом материале, является очень высокоточным методом. Его специфичность достигает 99%. Это говорит о том, что погрешность есть, но она крайне мала и при использовании данного теста с точностью можно диагностировать коронавирус. Как готовиться к сдаче теста методом ПЦР (приходить натощак или нет)? Сколько по времени его делают (долго или результат теста на ковид делается сразу)? Если отсутствуют симптомы или, когда уже переболел, надо делать тест? И что это исследование значит (на коронавирус надо сдать кровь или мазок)? Из нашей статьи вы узнаете о том, откуда берётся клинический материал, как проводится исследование и влияют ли правила подготовки и прочие требования на его точность.

Что такое ПЦР анализ на коронавирус и что он показывает?

Что такое метод полимеразной цепной реакции? Что он показывает и как выглядит? Если проводится анализ ПЦР на ковид, это означает, что при проведении особого лабораторного теста пробы биоматериала пациента подвергаются молекулярной диагностике, позволяющей выявить коронавирус. В процессе исследования будет проведена обработка проб химическим реагентом, что вызовет выделение фрагментов генетического материала возбудителя вируса SARS-CoV-2. Чтобы чужеродные нуклеиновые кислоты стали заметны для лабораторного оборудования их количество увеличивают посредством амплификации ферментом полимеразой и воздействия слабых электрических токов. После этого по наличию или отсутствию светящихся полосок оранжевого цвета будут определять контагиозность («заразность») обследуемого пациента.

Обследование на наличие РНК патогена обеспечивает этиологическую дифференциальную диагностику с другими ОРЗ и гриппом, а также даёт возможность своевремен­но выявлять опасных в эпидемиологическом отношении лиц и изолировать их согласно правилам профилактики распространения вируса. Кроме того, определив этиологию заболевания врач верно подберёт терапевтичекую тактику и подходы к лечению пациента.

Метод ПЦР на коронавирус: как делается забор биоматериала?

Что и как берётся для проведения исследования методом полимеразной цепной реакции на наличие РНК SARS-CoV-2? Основным видом биологического материала является отделяемое зева и носа. Поэтому сдаётся на анализ мазок из ротоглотки или носоглотки, но чаще всего делают оба мазка. Процедура забора образцов слизистой, которую требует ПЦР тест на коронавирус, может быть неприятной, но важно, что она не занимает более нескольких десятков секунд, а её результат показывает заражён человек в действительности или нет. А как берут мазок? Отбор проб для анализа на коронавирус осуществляется при помощи сухого стерильного одноразового зонд-тампона с синтетическим волокном. Лёгким движением по наружной стенке полости носа его вводят на глубину 2-3 см и слегка опускают вниз. Удаляют зонд вращательными движениями. Мазок из ротоглотки берётся вторым зондом с задней стенки глотки, поверхности миндалин и нёбных дужек. Концы зондов отламывают и помещают в пробирку с раствором для последующей транспортировки в лабораторию (для большей концентрации возбудителя ковид-19 используется одна пробирка). До проведения теста образцы биоматериала считают потенциально инфекционными.

Мазок: как подготовиться к сдаче ПЦР на ковид и сколько он делается?

Одной из оценок показателей качества любого метода исследования является его точность. Она связана не только с тем, как будет взят образец биоматериала и с соблюдением санитарных правил по его транспортировке, но и от того, насколько ответственно пациент подходит к подготовке перед сдачей лабораторного теста. От того, на какой день и как правильно сдавать мазок для анализа на COVID-19 (ковид), будут напрямую зависеть результаты тестирования. В свою очередь, при недостаточной и неверной подготовке тест ПЦР на коронавирус с большой долей вероятности покажет ложноотрицательный результат. Как правильно подготовиться? Можно ли есть и пить непосредственно перед сдачей мазка или за сутки уже надо от всего отказаться? О том, что нельзя делать и какие существуют условия и рекомендации по подготовке к сдаче анализа на коронавирус методом ПЦР читайте далее.

Перед взятием биоматериала для исследования нужно отказаться:

за сутки: от приёма антимикробных препаратов и употребления алкогольных напитков;

за 2-4 часа: от курения, жевательной резинки; применения ополаскивателя для полости рта, назальных препаратов и ингаляторов; приёма пищи и напитков (включая воду).

Тест ПЦР на коронавирус: как расшифровывается результат?

К одному из преимуществ данного исследования при выявлении РНК SARS-CoV-2, относится и простота интерпретации его результатов. Поэтому вопроса о том, как расшифровать тест на ковид, не возникает. Результат качественного анализа на коронавирус методом ПЦР может быть представлен в формате: «–» и «+». Где «–» будет означать отрицательный результат и отсутствие проявлений инфекций и вирусов, а «+» будет означать положительный результат и свидетельствовать о наличии инфекции.

Сколько действует результат анализа на коронавирус ПЦР?

По результатам исследования пациент получит справку. Она может быть необходима для предоставления на учёбу, работу и пр. Срок годности результата анализа ПЦР на коронавирус зависит от целей получения справки, но в среднем это 2-4 дня. Более точную информацию необходимо уточнить по месту требования результата ПЦР исследования.

Источник

ПЦР – полимеразная цепная реакция (PCR, Polymerase Chain Reaction)

Что такое ПЦР. Чувствительность и специфичность ПЦР.

Рис. Схема ПЦР

Изящность, простота исполнения в лабораторных условиях, непревзойденные показатели чувствительности и специфичности полимеразной цепной реакции принесли новому методу небывалую популярность. За короткое время ПЦР-анализ распространился по всему миру, быстро выйдя из лабораторий научных институтов в сферу практического использования. Метод нашёл применение в археологии, в практике судебной медицины, в области медицинской генетики, прежде всего, для оценки предрасположенности человека к некоторым онкологическим и генетическим заболеваниям. Но особенно широко ПЦР-анализ стал использоваться для диагностики различных инфекционных заболеваний, в частности, заболеваний, передающихся половым путём (ЗППП), диагностики вирусных гепатитов и ВИЧ-инфекции, туберкулёза, клещевого энцефалита, острых респираторных и кишечных инфекций и множества других. На сегодняшний день практически нет инфекционного агента, которого нельзя было бы выявить с помощью метода ПЦР. Для диагностики некоторых урогенитальных инфекций, например, Mycoplasmagenitalium – возбудителя воспалительных заболеваний мочеполового тракта, ПЦР как метод молекулярной диагностики, стал «золотым стандартом», проверенным временем и тщательно апробированным клиниче

Достоинства ПЦР как метода молекулярной диагностики.
Метод ПЦР, в отличие от других, традиционно используемых для диагностики инфекционных заболеваний (иммуноферментный анализ (ИФА), бактериологический посев, микроскопия и др.), характеризуется целым рядом достоинств, которые позволили вывести лабораторную диагностику на качественно новый уровень.

1. Прямое определение наличия возбудителей Выявление методом ПЦР специфического участка ДНК возбудителя в клиническом материале дает прямое указание на присутствие конкретного возбудителя инфекции. В отличие, например, от иммуноферментного анализа, который, выявляя белки-маркеры – «продукты жизнедеятельности» инфекционного агента, дает опосредованное свидетельство наличия инфекции.

Возможность одновременного выявления нескольких микроорганизмов в одной биологической пробе, в отличие от бактериологических методов, где для разных возбудителей используются разные способы культивирования.

2. Высокая cпецифичность
Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного микро-(макро)-организма участок его генетического материала. Согласно имеющимся данным, специфичность ПЦР-анализа для хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 95-99 %.

4. Универсальность процедуры выявления различных возбудителей
Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК или РНК возбудителя. Сходство химического состава нуклеиновых кислот всех микро-(макро)-организмов позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований, а также использовать для диагностики различный биологический материал: соскобы эпителиальных клеток урогенитального тракта, цельную кровь, плазму, сыворотку, мочу, сперму, секрет простаты, фекалии, плевральную и спинномозговую жидкости, мокроту, слюну, биоптаты различных органов и др. Материалом для исследования методом ПЦР могут служить вода, почва, продукты питания.

Для проведения ПЦР-анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени как, например, при бактериологическом посеве, также нет необходимости сохранять возбудителя в живом состоянии. Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при диагностике скрытых или хронических инфекций.

5. Скорость проведения анализа
Унифицированный метод обработки биоматериала, автоматизация процесса «размножения» искомого фрагмента ДНК и его последующей детекции как продукта реакции, дают возможность провести полный анализ в течение короткого времени (от нескольких часов до одного дня).

6. Возможность одновременной диагностики многих возбудителей (анаэробов и аэробов; вирусов, бактерий и грибов).

7. Для некоторых микроорганизмов ПЦР является практически единственным методом диагностики (например, для Mycoplasma genitalium).

Как это используется?

Источник

Результаты анализов ПЦР

ПЦР-исследования уже долгое время входят в спектр лабораторно-диагностических исследований различных заболеваний.

За несколько десятилетий развития и совершенствования, методика стала для дерматовенерологической службы незаменимой.

В данной статье вы узнаете

Что представляют из себя ПЦР исследования и их результаты.

Искомым фактором служат уникальные последовательности генетического материала, которые присутствуют в микробной клетке только одного вида или штамма патогенных микроорганизмов.

Чаще всего целью исследования является ДНК бактерии или вируса, но метод ПЦР предоставляет результаты и по РНК микроорганизмов.

Для чего используются различные биологические материалы:

Результаты ПЦР диагностики представляют собой

данные о наличии или отсутствии заболевания это – наиболее простая, доступная информация.

Есть такие методики ПЦР, результаты анализов которых кроме установления самого факта инфицирования, позволяют оценить активность инфекции, динамику болезни и отклик на проводимое лечение.

Такой вариант называется «полимеразно-цепная реакция в реальном времени», максимально широко применяется в отношении пациентов с гемотрансмиссивными хроническими вирусными инфекциями – гепатитами, ВИЧ.

Главное преимущество методики – высочайшая чувствительность и специфичность.

Такие анализы быстро проводятся и очень точны.

Представляя достоверные данные, позволяют начать лечение как можно раньше.

ПЦР исследование состоит из трех этапов:

Результаты анализов ПЦР положительны, если предполагаемый возбудитель обнаружен.

Как таковой, утвержденной формы бланка результатов анализов нет.

Это связано с тем, что исследование и фиксацию данных проводит компьютер.

Соответственно, графы и данные в бланк вносятся так, как предусматривает программное обеспечение, под управлением которого работает аппарат.

Поэтому расшифровка результатов анализов требует от врача особой подготовки и опыта.

В случае, когда проводится полимеразно-цепная реакция в реальном времени, в бланке результатов анализов еще отдельно указывается количество выявленных копий генетического материала искомого микроорганизма.

Разумеется, если таковые будут выявлены в принципе.

Положительный результат

Все возбудители венерических заболеваний и гемотрансмиссивных инфекций (гепатиты, ВИЧ), попав в организм человека начинают размножаться, но при этом никак себя не проявляют.

Здесь имеет место так называемый инкубационный период или торпидное, скрытое течение инфекции.

В подобных случаях ПЦР все равно находит в диагностическом материале генетические маркеры возбудителей уже через несколько дней от момента заражения.

Для того, чтоб анализ стал положительным, достаточно одной молекулы ДНК или РНК патогенного микроорганизма в собранном диагностическом материале.

Для многих ранних аппаратов существует технологический порог чувствительности в 40 микробных тел.

Но, как правило, если человек действительно заражен той или иной венерической болезнью или ЗППП, то у него возбудителей в пробах бывает больше этого числа и анализ будет положительный.

Отрицательный результат

По большому счету, такой вариант возможен в двух случаях: человек не заражен или неправильно собран диагностический материал.

Конечно, нельзя исключать, что концентрация возбудителей в исследуемой пробе может оказаться ниже, чем порог чувствительности аппарата.

Но такая ситуация встречается крайне редко, и если у доктора есть сомнения, то анализ всегда можно повторить спустя некоторое время.

Если результаты диагностики ПЦР останутся отрицательными, то человек здоров.

В противном случае, при получении вторых анализов положительными, это значит, что пациент заражен и необходимо начинать его лечение.

Расшифровывать результаты ПЦР анализа должен лечащий врач

Идеально, чтоб это был тот же специалист, который проводит сбор диагностического материала для проведения исследования, может наблюдать пациента и отслеживать все изменения в здоровье человека.

К сожалению, клиническое течение современных венерических заболеваний и инфекций сильно отличается от классического.

В таких случаях даже результаты анализов ПЦР необходимо подкреплять данными других исследований:

Ситуации, когда данные разных методик противоречат друг другу, встречаются, к счастью, не часто. Например – ПЦР положительно, а ИФА положительно.

Такое бывает в конце лечения пациента, когда патогенные микроорганизмы уже уничтожены и в организме человека их нет.

Но антитела (иммуноглобулины) к антигенам возбудителей инфекции еще циркулируют в крови несколько недель или даже месяцев, лет.

При клиническом выздоровлении, такое несоответствие трактуется в пользу ПЦР, так как его результаты более точные, чем исследования на основании антител.

Культуральный посев считается наиболее чувствительным, но для получения его результатов приходится ждать несколько дней или даже недель.

Поэтому бактериологическое исследование проводится только тогда, когда ПЦР не может предоставить гарантированного точного ответа.

Важно уметь сопоставлять полученные данные анализов и клинические особенности протекания инфекции.

Так, в некоторых случаях результат ПЦР положителен, хотя возбудитель успешно элиминируется иммунной системой.

Так как пациент только что завершил лечение в его организме еще сохраняются погибшие патогенные микроорганизмы.

Их геном будет обнаружен, но все равно тогда положительный результат не означает наличие заболевания.

Ложноотрицательный результат ПЦР анализа возможен:

Очень большое значение имеет тщательное выяснение всех деталей и нюансов заболевания.

Особое внимание необходимо уделять тому, что и как применял человек от момента появления первых симптомов до обращения за квалифицированной медицинской помощью.

Например – антибиотики, которые можно купить в любой аптеке.

Самолечение часто приводит к значительному сокращению числа микробов из-за чего может случиться ложноотрицательный результат ПЦР анализа.

То есть роль человека, врача, сводится только к тому, чтоб правильно собрать диагностический материал и затем расшифровать полученные результаты.

Диагностические возможности метода

Этот способ лабораторных исследований очень универсален.

Существует ПЦР диагностика:

Источник

ПЦР анализ: что это такое? На какие 12 инфекций сдается?

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – наиболее информативный, точный и современный метод диагностики инфекционных заболеваний, позволяющий обнаружить возбудителя в организме пациента, даже если количество вредоносных клеток исчисляется единицами, и они пока не успели спровоцировать развитие болезни. Ещё 25 лет назад врачи не могли даже мечтать о таких возможностях, а сегодня сдать анализ ПЦР можно в любой крупной лаборатории.

ПЦР-диагностика открыла перед людьми многие другие ценные перспективы – с помощью этой методики можно изучать генные мутации, устанавливать отцовство, вычислять риск развития онкологических заболеваний, оценивать возраст и происхождение археологических артефактов и даже доказывать вину преступников, обнаруживая их ДНК в уликах. Но сегодня мы обсудим именно медицинский аспект этого открытия и расскажем вам, какие заболевания можно диагностировать методом ПЦР, как сдавать анализ и что означают его результаты.

Любое живое существо на Земле, будь то человек, животное или микроб, имеет гены – носители наследственной информации, которые представляют собой участки ДНК или РНК с определённой последовательностью нуклеотидов, уникальной для каждого организма. ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота) и РНК (рибонуклеиновая кислота) образует длинные молекулы, состоящие из двух нитей, закрученных в спираль друг относительно друга, и эти нити собираются из нуклеотидов, как из бусинок.

Допустим, требуется увидеть, есть ли в биологическом материале пациента ДНК или РНК инфекционного возбудителя или её фрагменты. Но как это сделать, если молекулы крошечные и их мало? Методика ПЦР даёт ответ: можно искусственно размножить вредоносную ДНК или РНК в лабораторных условиях, чтобы без труда её обнаружить и идентифицировать.

Суть полимеразной цепной реакции состоит в том, чтобы разъединить нити молекул и попытаться «подсадить» к их противоположным концам фрагменты ДНК или РНК возбудителей – если они подойдут, значит, это и есть искомый микроб. А добавленный в пробирку фермент под названием «ДНК-полимераза» запустит синтез новых копий нужных участков молекул, они многократно размножатся и станут заметны. Далее мы опишем простыми словами, как происходит этот удивительный процесс и для чего это необходимо.

Американский учёный Кэрри Муллис изобрел ПЦР в 1983 году, а спустя десять лет, в 1993 году, получил за своё открытие Нобелевскую премию по химии. Однако методика была несовершенной и требовала существенных доработок. На сегодняшний день существует уже более десятка видов ПЦР для разных диагностических целей.

В случае с ПЦР-диагностикой в режиме реального времени (Real-Time PCR) влияние человеческого фактора на итоги исследования минимально – пробирки помещаются в современный высокотехнологичный прибор и ни разу не открываются на протяжении всех циклов, включая анализ результатов, который тоже проводит умная машина. У этого способа только два очевидных недостатка – высокая стоимость и ограниченная доступность, поскольку амплификаторами нового поколения оснащена далеко не каждая лаборатория.

Какие инфекции позволяет выявить мазок на ПЦР?

Вот лишь неполный список тех вредоносных микроорганизмов, которые можно обнаружить с помощью ПЦР-анализа:

Обширное семейство герпес-вирусов, в том числе цитомегаловирус, варицелла-зостер, вирус Эпштейна-Барра и другие;

Методика ПЦР нашла своё применение не только в клинической медицине, но и в криминалистике, археологии, экологии, ветеринарии, фармакологии, генной инженерии и производстве продуктов питания – везде, где может оказаться полезным анализ ДНК.

[Видео] Полимеразная цепная реакция:

Плюсы и минусы ПЦР

К неоспоримым преимуществам метода полимеразной цепной реакции относятся следующие аспекты:

Точность. Диагностические приёмы, на которые опиралась медицина до начала эпохи ПЦР, зачастую основывались на косвенном определении возбудителей болезни: в ходе анализа искались антитела к ним, признаки их присутствия, продукты их жизнедеятельности. ПЦР же узнает конкретный микроорганизм «в лицо», обнаруживает его ДНК или РНК, следовательно, появляется возможность выбрать максимально эффективную тактику лечения;

Надежность. По этому параметру ПЦР-диагностика далеко опережает конкурентов и приближается к 100%. Правильнее будет сказать так: если условия подготовки, забора, транспортировки, проведения анализа и оценки итогов были соблюдены неукоснительно, никакой ошибки быть не может. Ложноотрицательный результат возможен только в случае некорректно взятого материала, а ложноположительный – в случае попадания посторонних примесей в образец на любом из этапов исследования;

Чувствительность. Методика ПЦР уникальна ещё и тем, что позволяет обнаружить инфекционного агента в пробе, даже если там содержится всего одна молекула его ДНК. Это открывает широкие возможности по своевременной диагностике заболеваний или даже предотвращению их развития, если возбудитель ещё не размножился и не активизировался в организме человека. Кроме того, ПЦР-анализ может определить так называемую вирусную нагрузку – вычислить примерное количество копий вируса в крови и дать ответ, насколько тяжело течение болезни, вероятен ли её рецидив в случае ремиссии, существует ли риск её передачи другим людям;

Универсальность. Можно сдать ПЦР-анализ всего один раз и получить ответ, имеются ли у вас какие-либо инфекции из целого списка вероятных диагнозов. Особенно это актуально в случае с заболеваниями, передающимися половым путём – они нередко соседствуют друг с другом. Загрузив образец биоматериала пациента в амплификатор и добавив в пробирку праймеры сразу нескольких возбудителей, специалист сможет обнаружить присутствие каждого из них;

Скорость. Как мы уже рассказали выше, весь цикл ПЦР-диагностики занимает по времени не более 2-3 часов. Разумеется, нужно сделать поправку на загруженность лаборатории и процесс сбора биоматериала, но большинство современных диагностических центров предоставляют своим пациентам готовые результаты анализа ПЦР в день обращения или на следующие сутки.

Как ни странно, недостатки у полимеразной цепной реакции тоже есть:

Очень высокие требования к чистоте образца. Попадание в пробу посторонних примесей на любом из этапов диагностики грозит получением ложноположительного результата. А микробов вокруг человека миллионы, они содержатся практически везде;

Вероятность амплификации ДНК мертвых микроорганизмов. Бывает так, что человек уже переболел, а молекулы погибшего возбудителя всё ещё присутствуют в его организме, прибор определяет их и также даёт ложноположительный ответ;

Проблема неопознанных инфекций и мутаций. Теоретически может быть так, что в образце будут присутствовать такие микробы, для которых вообще ещё не разработаны праймеры, или они существуют, но по какой-то причине не были включены в реакцию. Кроме того, возбудители инфекций постоянно мутируют, приспосабливаясь к меняющимся условиям и новым лекарствам. Соответственно, уже имеющиеся праймеры теряют актуальность, потому что перестают соответствовать своему прототипу.

Виды ПЦР

К сегодняшнему дню на вооружении медицины появилось более десятка различных видов полимеразной цепной реакции: рекомбиназная, вложенная, инвертированная, ассиметричная, ступенчатая, групп-специфическая, с обратной транскрипцией, с «горячим стартом» и так далее – все они разработаны с учётом конкретных диагностических требований. Человеку несведущему в молекулярной биологии было бы сложно, да и скучно разбираться в тонкостях этой типологии. По настоящему интересны те виды ПЦР, которые широко используются на практике и активно предлагаются пациентам. Вот об этих анализах давайте и поговорим подробнее.

ПЦР 12

Рекордсменом по популярности заслуженно выступает так называемый комплексный анализ ПЦР 12 – он называется так потому, что включает в себя 12 наиболее распространённых половых инфекций, а также контрольный тест на качество взятых материалов (КВМ).

Почему этот вид диагностики так актуален? Во-первых, потому что он соответствует печальным реалиям нынешнего времени, когда у одного пациента кожно-венерологического профиля обнаруживается целый «букет» нехороших болячек. Во-вторых, потому что лабораториям проще пользоваться готовым картриджем, который содержит сразу все необходимые праймеры. В-третьих, это выгоднее для самого пациента, поскольку комплексный анализ обойдется дешевле, чем обследование на наличие каждой ИППП по отдельности.

Как сдают анализ ПЦР 12? У мужчин берут мазок из уретры. Это не очень приятная, но вполне терпимая и быстрая манипуляция. У женщин берут эпителиальный соскоб из влагалища или с шейки матки. Эта процедура, как правило, не вызывает болезненных ощущений. О правилах подготовки к визиту в лабораторию читайте ниже.

Стандартный набор ПЦР 12 выглядит следующим образом:

Вирусы герпеса 1 и 2 типа;

Папилломовирусы 16 и 18 типа (онкогенные);

Микоплазмы двух типов – человеческая и генитальная;

Тринадцатым в этом списке выступает КВМ – контроль взятия мазка, который осуществляется путём поиска гена HMBS. Им обладают эпителиальные клетки, выстилающие уретру. Когда мазок берут из другого места, ищут другой ген. Если в образце будет обнаружено 250 и более копий нужного гена, значит, анализ ПЦР 12 взят корректно, и его итогам можно доверять. Если же копий специфического гена будет меньше нормы, лучше пройти повторную диагностику во избежание ложноотрицательного результата. Что касается положительных ответов, то они принимаются за истину в любом случае.

Список возбудителей, исследуемых в рамках анализа ПЦР 12, может отличаться в разных лабораториях. Например, туда могут быть включены дополнительные типы вируса герпеса или папилломовируса, тогда анализ будет называться «ПЦР 13» или «ПЦР 14». Иногда перечень, наоборот, сокращается до «ПЦР 4» (гонорея-трихомониаз-хламидиоз-микоплазмоз).

ПЦР качественная и ПЦР количественная

У этих двух видов ПЦР-диагностики принципиально разные цели: качественный анализ даёт ответ на вопрос, имеется ли вообще у пациента искомый микроб, то есть просто «да» или «нет». Только что рассмотренный комплекс ПЦР 12 относится как раз к этой категории.

Но существует ещё количественный анализ, или ПЦР в режиме реального времени. Метод основывается на том, что число новых ампликонов (копий заданного участка ДНК возбудителя болезни) прямо пропорционально их исходному количеству. То есть если в пробе с самого начала было много вредоносных молекул ДНК, то с каждым циклом полимеразной цепной реакции их будет становиться вдвое больше, а к концу процесса накопятся миллионы. Современные приборы амплификаторы следят за тем, как меняется количество копий, и по итогам исследования вычисляют примерную концентрацию возбудителя в организме пациента.

Для чего это нужно? В случае с бактериями, простейшими или грибками подобные сведения имеют спорную диагностическую ценность, поскольку численность колоний постоянно меняется под воздействием самых разных факторов, да и уничтожить такие микроорганизмы сравнительно просто. Другое дело – вирус. Это неклеточная форма жизни, которую невозможно истребить подобно тому, как антибиотики справляются с бактериями. В борьбе с вирусами человек может твёрдо рассчитывать только на свой иммунитет, а возможности противовирусных средств сильно ограничены. Именно когда дело касается вирусов, становится особенно актуальной методика ПЦР в режиме реального времени.

Вирусная нагрузка или виремия – это степень тяжести поражения организма вирусом. Показатель рассчитывается путём определения числа вирионов в биологическом материале, измеряется в МЕ или в количестве копий на 1 мл крови и служит для контроля над ходом терапии и предупреждения распространения вируса.

ПЦР количественная критически необходима носителям следующих инфекций:

Вирус иммунодефицита человека (ВИЧ);

Но и в случае с другими вирусами определение нагрузки может оказаться полезным – например, когда речь идёт о цитомегаловирусе, герпесе или папилломовирусе. Анализ поможет понять, грозит ли человеку очередное обострение болезни, и насколько высока вероятность передачи инфекции.

ВИЧ-инфицированным людям назначается антиретровирусная терапия. Её цель – максимально снизить вирусную нагрузку, а в идеале – сделать её неопределяемой. Но даже в этом случае существует риск заразить своего полового партнёра или партнёршу, поэтому не следует пренебрегать использованием презервативов.

[Видео] Вирусная нагрузка и её отслеживание для ВИЧ-инфицированных:

Что сдают на ПЦР-анализ?

При выборе типа биоматериала для диагностики врачи ориентируются на специфику инфекции, на её излюбленную локализацию. Ведь от того, попадет ли вредоносная ДНК в пробу, зависит то, будет ли получен достоверный результат анализа.

Для ПЦР берутся следующие материалы:

Мазок или эпителиальный соскоб со слизистых оболочек. Это может быть уретра, влагалище, шейка матки, цервикальный канал, анальное отверстие, ротовая, носовая и даже глазная полость. Мазки наиболее актуальны при диагностике заболеваний, передающихся половым путём. Для взятия мазка или соскоба используются зонды с разными наконечниками;

Кровь из вены берут, когда нужно обнаружить ВИЧ, гепатит, цитомегаловирус, мононуклеоз или какое-либо заболевание бактериальной этиологии, например, сифилис, холеру или боррелиоз;

Биологические жидкости (моча, слюна, сперма, мокрота, секрет предстательной железы, желудочный сок, плевральная, суставная, спинномозговая или амниотическая жидкость, а также бронхоальвеолярный лаваж) берутся по показаниям. Например, ПЦР-анализ мокроты используется при диагностике туберкулёза;

Пунктаты и биоптаты органов и тканей, как правило, берутся при подозрении на онкологию. Исключение составляет биопсия желудка, которую проводят для определения наличия Helicobacter pylori – бактерии, вызывающей гастрит и язвенную болезнь.

Хранение и транспортировка биоматериалов

Пробы подлежат отправке в амплификатор не позднее, чем через 2 часа после забора, если они находятся в помещении при комнатной температуре. Когда ПЦР-анализ нужно по какой-то причине отложить, пробирки с биоматериалами допустимо оставить в холодильнике на одни сутки при температуре 2 – 8°С. Максимальный срок хранения – 14 дней, но тогда пробы подвергаются глубокой заморозке (-20°С). После оттаивания они должны быть сразу использованы, повторное замораживание запрещено.

В подавляющем большинстве случаев ПЦР-диагностика проводится «день в день»: пациент приходит в клинику, где у него берут мазок или кровь и сразу отправляют биоматериал в лабораторию, поэтому беспокоиться о правилах хранения не стоит.

Как подготовиться к ПЦР-диагностике?

Правила довольно просты:

Мазок или соскоб из половых путей, как у мужчин, так и у женщин, сдается после 72-часового воздержания от сексуальных контактов, непосредственно перед забором нужно произвести туалет интимной зоны и 2-3 часа не мочиться. Прекрасной половине человечества не следует планировать визит в лабораторию во время менструации и сразу после неё, кроме того, запрещено использовать какие-либо средства, нарушающие естественное состояние микрофлоры влагалища (спринцевания, свечи). Всем пациентам необходимо завершить антибактериальную терапию (если таковая проводилась) не позднее, чем за 2 недели до ПЦР-анализа;

Кровь сдается из вены утром натощак;

Мочу и сперму собирают в маленькие стерильные контейнеры, которые можно приобрести в аптеке, если процедура забора будет производиться дома. Но не забывайте о сроках хранения и транспортировки биоматериалов – максимум 2 часа;

Слюну собирают после 3 часов воздержания от приёма пищи и напитков, допустимо только полоскать рот водой. Непосредственно перед забором рекомендуется помассировать область слюнных желёз.

Прочие, редко используемые виды биоматериалов собирают только в клинике, где вам и предоставят все необходимые пояснения относительно подготовки.

Результаты ПЦР-анализа

Выше мы упоминали о качественной и количественной ПЦР-диагностике, так вот, в первом случае расшифровка результатов не представляет никакой трудности: ответ либо положительный, либо отрицательный. И если условия подготовки, сбора биоматериала, проведения анализа и оценки итогов не были нарушены, то нет и причин сомневаться в достоверности полученных данных.

По-другому дело обстоит в случае с ПЦР количественной. Её результатом является число, демонстрирующее вирусную нагрузку. Измеряется виремия в МЕ/мл или в копиях/мл, при этом в одной МЕ (международной единице) содержится примерно 4 копии вируса (точную цифру нужно узнавать в лаборатории, проводившей анализ, поскольку оборудование у всех разное).

Например, для гепатита C вирусная нагрузка до 600 000 МЕ/мл считается низкой, 800 000 МЕ/мл – средней, а 1 000 000 МЕ/мл – уже высокой.

В некоторых клиниках для большей компактности результатов количественного анализа ПЦР используют записи следующего вида: 3*10 3 МЕ/мл, 4*10 4 МЕ/мл, 5*10 5 МЕ/мл и так далее. Чтобы понять, о какой цифре идёт речь, достаточно произвести умножение.

Сколько стоит сдать ПЦР?

Цены сильно разнятся в зависимости от региона и типа клиники. Дешевле обследоваться в государственном медучреждении, комфортнее и быстрее – в частном диагностическом центре, все логично.

Стоимость качественного ПЦР-анализа на наличие основных ЗППП (хламидиоза, гонореи, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомониаза), герпеса, гепатита и папилломовируса разных типов, ВИЧ, цитомегаловируса, хеликобактерии и т. д. составляет в среднем от 250 до 600 рублей за каждого конкретного возбудителя.

Количественный анализ почти всегда стоит дороже, чем качественный, а в случае с ВИЧ и гепатитом – значительно дороже. Например, больные гепатитом москвичи могут узнать свою вирусную нагрузку за 3500-6000 рублей, ВИЧ-инфицированные – за 11000-13000 рублей.

Пользуйтесь услугами муниципальных лабораторий или частных медицинских центров с проверенной репутацией – мы не будем их здесь называть во избежание рекламы, но вы легко их найдете, как только вобьете в поисковую строку запрос вида «сдать ПЦР анализ». В заключение хотелось бы напомнить о ценности своевременной диагностики инфекций: если вы подозреваете, что заразились чем-то, или, тем более, уже плохо себя чувствуете, не надейтесь на «авось» и не прибегайте к самолечению – лучше как можно скорее отправляйтесь к врачу. Берегите себя, и будьте здоровы!

[Видео] Врач дерматовенеролог, уролог Ленкин Сергей Геннадьевич расскажет о всех нюансах ПЦР анализа:

Источник

• ← Как расшифровать одкб
• Как расшифровать рсфср →