Как сделать мазок на малярию

ВЗЯТИЕ КРОВИ И ПРИГОТОВЛЕНИЕ ТОЛСТОЙ КАПЛИ ПРИ МАЛЯРИИ.

Инфекции человека

Приготовление мазка крови и толстой капли для диагностики малярии.

Инструментарий и материал должны быть стерильными. Предметное стекло — чистое, сухое, обезжиренное.

3. Подготовка пациента.

4. Приготовление мазка крови.

5. Приготовление «толстой капли».

6. Оформите сопроводительную документацию по известным Вам правилам и требованиям.

7. Транспортировка в лабораторию.

8. Поместите использованное оборудование в дезинфицирующий раствор.

9. Проведите обеззараживание перчаток.

Вам также может быть интересно

Техника забора крови и приготовления мазков для исследования на малярию.

Достоверное установление диагноза малярии осуществляется исследованием препаратов толстой капли крови и тонкого мазка, и обнаружением в них малярийных паразитов.

Для приготовления препаратов, кровь обычно берут из 4-го пальца левой руки (меньше подвергающегося загрязнению). Концевую фалангу 4-го пальца предварительно протирают кусочком марли или ваты, пропитанной спиртом, после чего спирту дают испариться с поверхности кожи. Укол наносят копьём на глубину 2-3 мм, в зависимости от толщины кожи.

Выступившую на месте прокола первую каплю крови снимают кусочком сухой ваты, дают появиться второй капле, из которой приготовляют препарат.

Предметные стекла должны быть тщательно обезжирены. Для этого их кипятят в мыльном растворе, затем промывают в мыльном растворе. Затем промывают водопроводной и дистиллированной водой и высушивают спиртом.

Приготовление толстой капли.

В капле крови, выступившей из укола, осторожно прикасаются по­верхностью предметного отекла, после чего легким круговым движением, распределяется кровь на большой поверхности, для того, чтобы слой крови не был чересчур толстым (величина капли как 2ух-копевчная монета).

Обычно на одно стекло берут 2 капли, на некотором расстоянии друг от друга, надпись делается восковым карандашом. Капле дают высохнуть на воздухе без подогревания в горизонтальном положении.

Приготовление тонкого мазка

На поверхность предметного стекла на средней линии, ближе к од­ному концу стекла наносят маленькую, каплю крови. Стекло, (каплей вверх и направо) прижимают к горизонтальной поверхности, стола, двумя пальцами правой руки (придерживать отекло следует за ребро). Правой рукой берут шлифованное стекло (край шлифованного стекла должен быть уже предметного), которое устанавливается по середине предметного стекла перед каплей под углом 45°.

Если стекло наклонять под меньшим углом, получится слишком тонкий мазок, а если шлифованное стекло наклонять под большим градусом — мазок будет очень толстым. Затем шлифованное стекло при том же накло­не подводиться к капле до соприкосновения с ней. Капля растекается в остром углу между стеклами;

После того, как кровь распределится ровной полоской между предмет­ным стеклом и краем шлифованного, стекла, последнее легким и быстрым движением продвигается по предметному стеклу в обратном направлении, т.е. справа налево, и кровь, следуя за шлифованным стеклом, тонким слоем равномерно распределяется по поверхности предметного стекла.

После того, как кровь высохнет, у одного края мазка иглой, углом предметного стекла или простым карандашом делают надпись (фамилия, дата, номер карточки и пр). Мазки высушиваются на воздухе (избегать подогревания, не допускать мух).

Высохшие на воздухе мазки, погружают для фиксации в широкогорлую банку с фиксирующей жидкостью (метиленовый алкоголь) на 3 мин или в смеси из равных частей спирта и эфира на 20-30 минут.

Приготовление мазков крови, толстой капли и их окраска

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

Подготовка предметных стекол для приготовления мазков крови и толстой капли

Качество препаратов крови зависит от чистоты предметных стекол, поэтому новые и бывшие в употреблении стекла подвергают специальной обработке. Для этого с них предварительно удаляют иммерсионное масло кусочком ватки, смоченной бензином или эфиром и помещают на 30 минут в кастрюлю с кипящим мыльным раствором. Многократно промывают водопроводной и дистиллированной водой и помещают в смесь, состоящую из равных частей 96° спирта и эфира. Подготовленные предметные стекла извлекают из смеси с помощью пинцета, вытирают тряпочкой без ворса и, не прикасаясь к ним руками, во избежание загрязнения их поверхности, складывают в коробки, чтобы предохранить от пыли.

Мазки крови приготовляют на чистых предметных стеклах, пользуясь шлифованными предметными или покровными стеклами, чтобы край этих стекол был уже поверхности предметного стекла, на котором готовят мазки, углы стекол иногда надламывают или надпиливают.

Приготовление мазков крови

Прием 1. Предметное стекло захватывают за длинные ребра большим и указательным пальцами правой руки и прикасаются противоположным концом стекла к свежевыступившей капле крови на расстоянии 1-1,5 см от края стекла.

Прием 2. (рис. 29, 1). Предметное стекло располагают между большим пальцем левой руки с одной стороны и указательным и средним — с другой так, чтобы капля крови оказалась сверху и справа.

Прием 3 (рис. 29, 2). Шлифованное предметное или покровное стекло располагают слева и от капли под углом в 45°, при этом его держат большим и указательным пальцами правой руки так, чтобы кончики пальцев касались его длинных ребер.

Общий анализ мочи

Данное исследование так же, как и анализ крови, назначается при наблюдении врачом клинической картины любого заболевания. Помогает, вместе с изучением крови, установить присутствие инфекции или воспалительного процесса и сделать заключение о его характере. В расшифровке этого исследования отмечаются следующие отклонения от нормальных показателей при заражении:

В сочетании с характерными изменениями в ОАК такие показатели мочи дают подозрения на малярию. Часто назначается также и биохимия.

Иммунологические методы диагностики малярии

С помощью серодиагностики малярии возможно выявить в сыворотке крови пациента антитела и растворимые паразитарные антигены. Серологические реакции показаны к применению в случаях появления у больных лихорадки неясного генеза, гепатоспланомегалии, анемии, а также для исследования крови донора — предполагаемого источника инфекции. Серологические реакции применяются при эпидемиологическом наблюдении за лицами, проживающими в неблагополучных по малярии в прошлом территориях.

Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции. Используются так же ИФА, РИГА и др. Внедряется в практику использование реакции энзим-меченых антител (РЭМА).

В случаях очень низкой паразитемии показано применение ПЦР (полимеразной цепной реакции). Дороговизна и сложность применения данной методики не позволяет широко ее использовать.

Разработаны новые методы диагностики малярии — экспрессного микроскопического анализа препаратов крови с использованием флюоресцирующих красителей, позволяющие в течение двух минут выявить паразитов тропической малярии, количество которых более 60 в 1 мкл гемолизированой крови.

При малярии антитела появляются на 8 — 27 день паразитемии. Первыми появляются антитела IgM, затем — антитела IgG. Антитела после перенесенной малярии и успешного излечения могут длительно сохраняться в крови человека — от 0,5 до 2 и даже 20 лет.

Рис. 15. Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции.

Тест на туберкулёз

Материал для исследования – кровь из пальца.

Экспресс-тест позволяет быстро выявить специфические антитела на начальной стадии заболевания. Для этого нужно поместить несколько капель крови в контрольное окошко. При положительном результате экспресс-теста нужно обратиться к врачу.

Однако для точной постановки диагноза этого недостаточно. Для этого сегодня используются квантифероновый тест и T-SPOT. Они одинаково информативны, однако в домашних условиях их выполнить невозможно.

Почему зимой появляются заеды на губах?

Характеристика развития малярийного паразита в эритроцитах

Проявления малярии обусловлены развитием паразита в эритроците — так называемой эритроцитарной шизогонией. В процессе эритроцитарной шизогонии образуются бесполые и половые формы паразита. Бесполые формы за период времени, характерный для каждого вида паразита, проходят в эритроцитах ряд последовательных возрастных стадий своего развития, строение которых (морфология) и их окрашиваемость (тинкториальные свойства) хорошо различимы в «тонком мазке» крови. Трофозоиты

— одноядерные растущие стадии: кольцевидные, развивающиеся (амебовидные, полувзрослые) и зрелые.
Шизонты
— делящиеся стадии: развивающиеся (незрелые), с последовательным делением ядер и общей цитоплазмой и зрелые, представляющие скопление дочерних клеток
мерозоитов
с обособленными ядрами и цитоплазмой. В динамике эритроцитарная шизогония в общем виде протекает следующим образом. Мерозоит, внедрившийся в эритроцит, быстро увеличивается в размере, в цитоплазме появляется пищеварительная вакуоль и образуется —
кольцевидный трофозоит
. На этой стадии цитоплазма имеет вид узкого ободка, огибающего пищеварительную вакуоль, ядро сравнительно мелкое, компактное с трудно различимой структурой хроматина, оттеснено к одному из полюсов клетки. По мере роста паразита увеличиваются его размеры, количество цитоплазмы нарастает: ядро становится более крупным, менее компактным. В цитоплазме могут появиться асимметричные утолщения, различающиеся по форме и числу, псевдоподии — образуется
амебовидный трофозоит
. В дальнейшем у развивающегося трофозоита постепенно исчезает вакуоль, продолжает увеличиваться ядро и количество цитоплазмы — образуется
зрелый трофозоит
. Зрелый трофозоит — округлая или несколько вытянутая клетка с относительно рыхлым ядром, правильной или несколько вытянутой формы, занимающая весь или часть пораженного эритроцита. Затем наступает стадия
шизонта
, начинается попарное деление ядер, образуется
развивающийся (незрелый) шизонт
. По окончании деления ядер одномоментно делится цитоплазма, обособляясь вокруг каждого из дочерних ядер — образуется
зрелый шизонт
, состоящий из мерозоитов; их число, размеры и расположение по отношению к скоплению пигмента характерны для каждого вида плазмодиев (см. таблицы). При отсутствии или неэффективном лечении мерозоиты внедряются в интактные эритроциты, и цикл вновь повторяется с присущей для каждого вида плазмодиев продолжительностью развития одной генерации. У
Р. falciparum, P. vivax, P. ovale
— 48 ч,
Р. malariae
— 72 ч. В процессе роста паразита в его цитоплазме появляется
малярийный пигмент
— продукт метаболизма гемоглобина, представляющий собой включения от едва заметных мелких зерен и гранул до относительно более крупных, неправильной формы, от золотисто-коричневого до черного цвета. Количество пигмента, размеры его частиц и распределение в цитоплазме паразита меняются по мере его перехода в последовательные стадии развития. У части трофозоитов деления ядер не происходит и они дифференцируются в половые формы,
гаметоциты
— женские (макрогаметоциты) и мужские (микрогаметоциты). Мужские и женские гаметоциты различаются между собой по морфологии, в первую очередь по структуре ядра, характеру и окраске цитоплазмы. В отличие от бесполых форм гаметоциты не имеют выраженной вакуоли, характеризуются значительно более обильным и грубым пигментом. Округлая форма присуща гаметоцитам
Р. vivax, Р. ovale
и
Р. malariae
, удлиненная серповидная (полулуния) —
Р. falciparum
. Гаметоцитов образуется меньше, чем бесполых форм. При этом женских гаметоцитов в 3-5 раз больше, чем мужских, что затрудняет выявление последних. Гаметоциты
Р. vivax, Р. ovale, P. malariae
значительно отличаются от гаметоцитов
Р. falciparum
по срокам созревания, появления в периферической крови и сохранения способности заражать переносчика (самок комара Р. anopheles).

Р. vivax, Р. ovale и Р. malariae развиваются в эритроцитах, циркулирующих в периферической крови. Развитие Р. falciparum происходит в синусах селезенки и мелких капиллярах внутренних органов в связи с адгезией пораженных эритроцитов к стенкам таких капилляров. В периферической крови обнаруживаются, преимущественно при неосложненном течении, только самые молодые стадии — кольцевидные трофозоиты. Их число очень быстро нарастает, поэтому при однократном исследовании периферической крови в начале болезни можно получить неправильное представление об истинном числе паразитов. При осложненном течении в периферической крови могут быть обнаружены более зрелые возрастные стадии паразита и гаметоциты в связи с нарушением сосудистого тонуса. При оценке результатов исследования препаратов крови, наряду с типичной морфологией возбудителя, необходимо учитывать ряд особенностей, характеризующих паразитологическое развитие инфекции собственно и привходящих воздействий (предшествовавшее применение противомалярийных препаратов, неправильное приготовление и окраска препаратов крови).

Источник

Анализ на малярию (Плазмодии малярии в крови)

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Различают 4 вида плазмодиев:

Для установления видовой принадлежности малярийных паразитов имеет значение следующее: наличие полиморфизма возрастных стадий или одной ведущей, их сочетание с гаметоцитами; морфология разных возрастных стадий, их размеры по отношению к поражённому эритроциту; характер, размер ядра и цитоплазмы; интенсивность пигмента, его форма, размеры зёрен/гранул; количество мерозоитов в зрелых шизонтах, их размеры и расположение по отношению к скоплению пигмента; склонность паразита к поражению эритроцитов определённого возраста (тропизм); склонность к множественному поражению отдельных эритроцитов несколькими особями паразитов и его интенсивность; размеры поражённых эритроцитов по отношению к непоражённым, форма поражённых эритроцитов, наличие азурофильной зернистости в поражённых эритроцитах; форма гаметоцитов.

При острых приступах малярии прослеживается определённая закономерность изменений крови. Во время озноба появляется нейтрофильный лейкоцитоз со сдвигом влево. В период лихорадки количество лейкоцитов несколько уменьшается. При появлении пота и при апирексии нарастает моноцитоз. В дальнейшем после 2-4 приступов появляется анемия, которая особенно рано и быстро развивается при тропической лихорадке. Анемия носит в основном гемолитический характер и сопровождается повышением содержания ретикулоцитов. В мазках крови обнаруживают пойкилоцитоз, анизоцитоз, полихроматофилию эритроцитов. При присоединении угнетения костного мозга количество ретикулоцитов уменьшается. Иногда отмечается картина пернициозоподобной анемии. СОЭ при малярии значительно повышается.

В межприступный (безлихорадочный) период в крови при всех формах малярии кроме тропической преобладают взрослые трофозоиты. В этот период болезни те или иные стадии плазмодиев присутствуют в крови постоянно, вплоть до полного прекращения эритроцитарной шизогонии. В связи с этим нет необходимости брать кровь на исследование только на высоте малярийного приступа, а можно исследовать её в любое время. Отсутствие плазмодиев малярии в мазках крови и толстой капле больного малярией отражает лишь тщательность проведённого исследования и профессиональную компетентность специалиста лаборатории.

В тех случаях, когда нет возможности определить количество лейкоцитов у данного больного, их число в 1 мкл по рекомендации ВОЗ условно принимают равным 8000.

Контроль за эффективностью лечения проводят путём исследования толстой капли крови с подсчётом паразитов в 1 мкл крови. Исследование необходимо выполнять ежедневно с 1-го по 7-й день от начала химиотерапии. При исчезновении паразитов в течение этого периода дальнейшее исследование крови проводят на 14-, 21- и 28-й день от начала лечения. При выявлении резистентности (оценивают по уровню паразитемии) и соответственно неэффективности лечения противомалярийный препарат заменяют на специфический препарат другой группы и исследование крови проводят по той же схеме.

За больными, перенёсшими тропическую малярию, устанавливают диспансерное наблюдение в течение 1-2 мес, при этом с интервалом 1-2 нед проводят паразитологическое исследование крови. Диспансеризацию больных, перенесших малярию, вызванную P. vivax, P. ovale и P. malariae, следует проводить в течение 2 лет. При любом повышении температуры тела у этих лиц необходимо лабораторное исследование крови с целью обнаружения малярийных плазмодиев.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11]

Источник

Основные методы лабораторной диагностики малярии у детей и взрослых

Малярия – это инфекционно-паразитарное заболевание, для которого характерно поражение эритроцитов простейшими внутриклеточными паразитами рода Plasmodiu.

Это паразитарное, трансмиссивное (попадает через кровь) заболевание, передающееся через укусы комаров рода Anopheles, инфицированных простейшими рода плазмодий (Plasmodium). Само заболевание проявляется лихорадкой и другими комплексами симптомов; течение его прогрессирующее, хроническое с частыми рецидивами.

Ранее малярию называли «болотной лихорадкой» (дело в том, что возбудитель чаще всего встречается в местах с повышенной влажностью и теплым климатом, где создаются хорошие условия для жизни самого паразита и переносчика болезни – комара). Название «малярия» переводится с итальянского языка как «плохой воздух». Причину заболевания открыли европейцы в конце XIX века.

Малярия достаточно древнее заболевание, но и на данный момент оно распространено во всем мире, особенно в странах Африки. По официальной информации ВОЗ, ежегодно малярией заболевает около 200 млн. людей, примерно 0,3% из всех случаев заканчиваются смертью больного. Благодаря комплексным мероприятиям, направленным на борьбу с малярией, смертность от нее с 2000 к 2013 г. уменьшилась примерно на 50%.

Диагностика малярии

Критерии диагностики малярии

Как сделать анализ крови на малярию?

Существуют несколько видов возбудителей малярии: плазмодия трехдневной, четырех­дневной и тропической лихорадки.

Кровь для анализа у пациента необходимо брать во время приступа, возможно и в межприступный период. В ряде случаев – при малой концентрации плазмодиев забор крови для анализа производится в течение суток каждые 4-6 часов.

Кровь исследуют, так называемым методом толстой капли, а так же методом окрашенных мазков. При помощи данных исследований, возможно определить фор­му заболевания. При поражении более 2% эритроцитов выставляется диагноз тропической малярии.

Лечение малярии

Первая помощь при малярии заключается том, чтобы при малейших признаках заболевания (повышение температуры тела, озноб после посещения южных стран) незамедлительно посетить врача или вызвать скорую помощь. Заниматься самолечением — опасно для жизни.

Для лечения малярии все больные госпитализируются в инфекционное отделение больницы, нахождение заболевшего дома не допускается.

Для лечения применяют противомалярийные препараты. Если нет возможности провести анализ для выявления возбудителя, а вероятность малярии высока (выражены симптомы, неблагоприятный по заболеванию регион), то следует сразу начать лечение.

Резистентность инфекции

Развитие резистентности, или устойчивости возбудителей к лекарствам, представляет собой одну из самых серьёзных проблем при борьбе с малярией и приводит к увеличению заболеваемости и смертности от неё. Устойчивость к противомалярийным препаратам подтверждена у двух малярийных паразитов человека: Plasmodium falciparum и P. vivax, встречающихся в Юго-Восточной Азии, Океании, Южной Америки, Восточной Африке. Остальные виды, как правило, хорошо поддаются лечению.

Предотвращение рецидивов малярии, вызванной P. vivax и P. ovale

Профилактика поздних рецидивов вызванных P. vivax и P. Ovale заключается в полном и своевременном лечении больных с последующим неоднократным лабораторным контролем излеченности и проведением диспансерного наблюдения (до двух лет).

Исходя из состояния больного и проявлений болезни, назначается комплекс патогенетической и симптоматической терапии (дезинтоксикация, противоаллергические средства, восстановление функции печени).

Критерии выздоровления:

Диагностика малярии с использованием микроскопического метода

Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка, позволяющая обнаружить паразитов, их количество и видовую принадлежность, является ведущим методом диагностики малярии. Она проводится при малейшем подозрении на это заболевание, независимо от температурной реакции пациента.

Для определения видовой принадлежности паразитов и стадии заболевания используется тонкий мазок крови. В толстой капле локализуется больше паразитов, чем в мазке. Этот метод диагностики превосходит методику определения наличия возбудителей малярии в тонком мазке крови в 20 — 40 раз.

В периферической крови паразиты обнаруживаются через определенное время после заражения:

Паразиты в крови присутствуют как во время лихорадочного приступа, так и в межприступный период и при паразитоносительстве.

Техника приготовления «толстой» капли

Полученная при проколе пальца капля крови наносится на предварительно очищенное и сухое предметное стекло и размазывается до получения пятна 1 см в диаметре. После подсушивания на воздухе предметное стекло заливается краской Романовского—Гимзы. По истечении 40-минутной экспозиции препарат ополаскивается под проточной водой и подсушивается при комнатной температуре, установленный в вертикальное положение.

Под микроскопом исследуется не менее 100 полей зрения. Более эффективным считается исследование 2-х толстых капель в течение 2,5 минут, чем 1-й капли в течение 5-и минут. 100 полей зрения просматриваются даже в том случае, когда малярийные плазмодии выявились уже в первых полях. Это производится для того, чтобы не пропустить микст-инфекцию.

Порог обнаружения паразитов

Порогом обнаружения малярийных плазмодиев называется минимальная концентрация возбудителей, которую возможно выявить при микроскопировании препарата «толстая капля». При заболевании этот показатель составляет 5 паразитов в одном микролитре крови. При просмотре 100 полей зрения обследуется 0,2 мкл крови.

При наличии косвенных признаков малярии (пребывание в эндемичных зонах, гипохромная анемия, обнаружение пигмента в моноцитах) и отрицательных результатов исследования препаратов «толстая капля», исследование вновь повторяется более тщательно, и не одно, а серия, состоящая из 4 — 6 препаратов при одном уколе, либо полученных при заборе крови, который производится 4 — 6 раз в сутки в течение 2 — 3 дней.

Интенсивность паразитемии определяется знаком «+».

Интенсивность паразитемии можно вычислить по количеству паразитов на 100 эритроцитов в 10 полях зрения, либо по соотношению числа паразитов и лейкоцитов в 1 мкл крови.

По интенсивности паразитемии определяется прогноз при тропической малярии. При других видах заболевания более 2% эритроцитов не поражается.

Победить паразитов можно!

Сейчас действует льготная программа на бесплатную упаковку. Читать мнение экспертов.

Список литературы

Лучшие истории наших читателей

Тема: Во всех бедах виноваты паразиты!

От кого: Людмила С. (ludmil64@ya.ru)

Кому: Администрации Noparasites.ru

Не так давно мое состояние здоровья ухудшилось. Начала чувствовать постоянную усталость, появились головные боли, лень и какая-то бесконечная апатия. С ЖКТ тоже появились проблемы: вздутие, понос, боли и неприятный запах изо рта.

Думала, что это из-за тяжелой работы и надеялась, что само все пройдет. Но с каждым днем мне становилось все хуже. Врачи тоже ничего толком сказать не могли. Вроде как все в норме, но я-то чувствую, что мой организм не здоров.

Решила обратиться в частную клинику. Тут мне посоветовали на ряду с общими анализами, сдать анализ на паразитов. Так вот в одном из анализов у меня обнаружили паразитов. По словам врачей – это были глисты, которые есть у 90% людей и заражен практически каждый, в большей или меньшей степени.

Мне назначили курс противопаразитных лекарств. Но результатов мне это не дало. Через неделю мне подруга прислала ссылку на одну статью, где какой-то врач паразитолог делился реальными советами по борьбе с паразитами. Эта статья буквально спасла мою жизнь. Я выполнила все советы, что там были и через пару дней мне стало гораздо лучше!

Улучшилось пищеварение, прошли головные боли и появилась та жизненная энергия, которой мне так не хватало. Для надежности, я еще раз сдала анализы и никаких паразитов не обнаружили!

Источник