Как сделать мазок отпечаток
Как сделать мазок отпечаток
Существует целый ряд заболеваний, клинический диагноз которых (малярия, возвратный тиф и др.) может быть подтвержден при помощи микроскопических исследований фиксированных и окрашенных тонких мазков из периферической крови или в препаратах «толстой капли» крови.
К переднему краю капли ставят шлифованное предметное стекло под углом 45 градусов. После того как кровь растечется по краю стекла, его продвигают вперед так, чтобы на предметном стекле получился равномерный тонкий мазок. Мазки крови вначале высушивают на воздухе, а затем фиксируют метиловым спиртом или смесью Никифорова.
В том случае, когда концентрация микроорганизмов в крови невелика и их не удается обнаружить в тонких мазках, необходимо приготовить препарат «толстой капли». Для этого на предметное стекло наносят 2 – 3 капли крови, полученной при проколе мякоти пальца, и распределяют на стекле в виде пятно 10 – 15 мм. Препарат высушивают на воздухе и для разрушения эритроцитов (чтобы они не мешали обнаруживанию микробов) на мазок осторожно наносят 1 – 2 капли дистиллированной воды. Через несколько минут высушенный и зафиксированный препарат окрашивают, промывают струей воды, высушивают и изучают при помощи иммерсионного микроскопа.
Приготовление мазков из испражнений
При исследовании кроваво – слизистого или жидкого стула с целью выявления кишечных патогенных простейших начинать исследования необходимо со слизи. Отобранный кусочек слизи, наносят на предметное стекло. Для того, чтобы слой слизи был тонким, его необходимо расправить препаровальными иглами. После этого препарат накрывают покровным стеклом и исследуют микроскопически.
Таким же способом готовят мазок и из жидкого калового стула.
Мазок из оформленного или густого кашицеобразного стула готовится следующим образом: в капле физиологического раствора, предварительно нанесенной на предметное стекло, ополаскивают конец тонко заостренной деревянной палочки, предварительно погруженной в кал. Полученная взвесь накрывается покровным стеклом и производится просмотр при помощи микроскопа для первоначальной ориентировки. Точное определение паразитов осуществляется в фиксированных и окрашенных препаратах.
Исследование не окрашенных и окрашенных препаратов начинают с просмотра мазков при помощи малого увеличения. Малое увеличение дает возможность охватить большее поле зрения, и, следовательно, быстрее могут быть обнаружены паразиты. Детальное же изучение паразита проводится при помощи иммерсионного объектива.
Приготовление микропрепаратов из мокроты,
мочи и спинномозговой жидкости
Для исследования мокроты ее выливают в чашку Петри из емкости, в которой она находится. Бактериологической петлей выбирают гнойные комочки и размазывают их тонким слоем по поверхности предметного стекла.
При исследовании мочи ее собирают в сосуд. Дают ей отстояться на холоду или центрифугируют. Из полученного осадка готовят микропрепараты.
При микроскопическом исследовании спинномозговой жидкости микропрепараты готовят из фибринозного сгустка или из осадка, полученного при отстаивании или центрифугировании жидкости.
Препараты следует готовить с большой осторожностью. После того как препараты высохнут, их фиксируют и окрашивают.
Приготовление препарата «мазок – отпечаток»
из органов инфицированного макроорганизма
Необходимость приготовления мазка – отпечатка из селезенки, печени, костного мозга, лимфоидной ткани возникает по разным причинам: определить первостепенность обсеменения того или иного органа в зависимости от пути и времени проникновения возбудителя в макроорганизм, активности ответной реакции иммунокомпетентных органов, вирулентных особенностей возбудителя (отношение к капсулообразованию) и пр.
Для приготовления мазка – отпечатка необходимо стерильно сделать горизонтальный срез органа и на свежий срез быстро и аккуратно без приложения усилий накладывается стерильное обезжиренное предметное стекло. И также быстро поднимается вертикально вверх, без смещения в какую – либо сторону.
Препарат высушивается на воздухе, фиксируется в жидком фиксаторе, промывается осторожно проточной водой, высушивается, окрашивается и микроскопируется.
Микроскропия мазков-отпечатков. Техника приготовления мазка-отпечатка и окраски его
Приготовление реакт ивов для окраски по Граму. Карболовый фуксин Циля. 1 г основного кристаллического фуксина растирают в ступке с 5 г кристаллической карболовой кислоты (фенола) и 0,5 мл глицерина. Во время растирания небольшими порциями прибавляют 10 мл 96%-ного этилового спирта. После того как краска полностью разотрется, прибавляют при постоянном помешивании 100 мл дистиллированной воды. Раствор краски фильтруют. Фуксин Циля стойкий и его хранят во флаконах из темного стекла с притертой пробкой.
Водный фуксин Пфейффера. Готовят из карболового фуксина Циля в соотношении 1:10 на дистиллированной воде. Раствор нестойкий, готовится перед использованием.
Генцианвиолетовыйраствор для окраски по Граму. 1 г генцианвиолета растирают в ступке с 2 г кристаллической карболовой кислоты (фенола). Во время растирания небольшими порциями прибавляют 10 мл 96%- ного этилового спирта. После того как краска полностью растворится, прибавляют при постоянном помешивании 100 мл дистиллированной воды. Раствор краски фильтруют через бумажный фильтр. Растворы нестойкие.
Раствор Люголя. В 10 мл дистиллированной воды растворяют 2 г йодистого калия. Затем прибавляют 1 г кристаллического йода. Раствор выдерживают 5-6 ч до полного растворения йода, после чего прибавляют 290 мл дистиллированной воды. Хранят раствор в склянке из темного стекла.
Методика приготовления и окраски мазков. Мазки готовят с верхнего и глубокого слоев каждой пробы. Из профламбированной пробы стерильными ножницами вырезают кусочек мяса размером не менее 1,5×2,0x2,5 см, поверхности срезов прикладывают к стерильному предметному стеклу (по три отпечатка на двух предметных стеклах). Мазки обводят с обратной стороны предметного стекла восковым карандашом, затем высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем газовой горелки и красят по Граму. На фиксированные мазки через полоску фильтровальной бумаги наливают карболовый генцианвиолет, через 2 мин краску сливают и мазок промывают водой, после чего на 2 мин наливают раствор Люголя, далее на 1 мин наливают йодированный спирт, в заключение мазок промывают водой и окрашивают фуксином в течение 2 мин. Затем мазок промывают и высушивают фильтровальной бумагой. Мазок микроскопируют при помощи биологического микроскопа (рис. 23) на большом увеличении микроскопа (630-1400 раз).
Окраска мазка на капсулы В. anthracis по Ольту. Приготовленные мазки окрашивают 2%-ным водным раствором сафранина в течение
Рис. 23. Биологический микроскоп Микротон-209
1—3 мин и промывают дистиллированной водой. При микроскопии под увеличением 630-900 раз В. anthracis видна как крупная палочка кирпично-красного цвета, окруженная капсулой светло-желтого цвета.
Как сделать мазок отпечаток
Выявить гликоген можно также, поместив между двумя отпечатками полоску фильтровальной бумаги, смоченную раствором йода. Препарат исследуют сразу после окрашивания, потому что через несколько часов окраска значительно бледнеет. При необходимости ее легко восстановить вышеуказанными способами.
Микроскопическое исследование производят с объективом 20X при закрытой апертурной диафрагме. Гликогенсодержащие клетки хорошо видны на бесцветном или слабом желтом фоне. Они выделяются насыщенным коричневым (кирпичным) цветом цитоплазмы, которая равномерно заполнена окрашенными пылевидными гранулами гликогена; ядра остаются бесцветными, однако контуры их различимы.
Наряду с гликогенсодержащими клетками учитывают количество клеток (с ядрами), не содержащих гликоген. Расположение клеток в препарате схематически изображают в рабочем журнале, чтобы найти их повторно для изучения других признаков.
После исследования на гликоген отпечаток фиксируют 10 мин в метиловом (100% этиловом) спирте и окрашивают азур-эозином. При мпкроскопировании применяют объективы 20X и 90Х.
На окрашенном препарате можно обнаружить различные клетки: безъядерные (из верхних слоев эпидермиса), эпителиоциты переходного эпителия, лейкоциты, сперматозоиды, клетки вагинального эпителия. Безъядерные клетки эпидермиса могут быть одиночными, в небольшом количестве или заполнять все поле зрения.
Они могут быть и в виде клеточных групп или фрагментов слоя толщиной в один ряд и более. Их присутствие облегчает ориентирование в препарате, особенно при малом количестве клеточных элементов. Среди клеток с ядрами обращают на себя внимание прежде всего клетки покровного слоя переходного эпителия.
Они выделяются крупными размерами, четкими округлыми контурами, имеют сферическое ядро, расположенное в центре. Хроматин в них имеет характерный зернистый рисунок, наиболее выраженный у ядер поверхностных клеток. В скоплении таких клеток прежде всего можно отметить сходство их между собой (изоморфность).
Рядом с ними могут обнаруживаться клетки из нижних рядов переходного эпителия овоидной н сферической формы, с плотными интенсивно окрашенными ядрами и голубой цитоплазмой. Вокруг клетки или небольших скоплений их, как правило, наблюдается некоторое количество лейкоцитов. Они имеют хорошо сохранившийся вид, как в мазке крови, что позволяет предполагать их происхождение из отделяемого мужской уретры, а не из следов женской крови.
Вагинальные клетки в отпечатках имеют различный вид в зависимости от степени сжатия, деформации, а также происхождения из того или другого слоя. В отличие от клеток уретры вагинальные клетки характеризуются большей деформацией и подиморфизмом. Клетки поверхностного слоя в препаратах встречаются в изолированном виде или в скоплениях.
Они представляют собой овальные или многоугольные пластинки с очень мелкими (точечными) ядрами, окрашивающимися гомогенно почти в черный цвет. Клетки нижних рядов этого слоя имеют овоидные ядра с различимой структурой хроматина. Промежуточные клетки отличаются большей толщиной протопласта, особенно вблизи ядра, и чаще встречаются в виде групп из нескольких клеток, границы которых плохо различимы. Их крупные овоидные ядра, расположенные несколько эксцентрично, имеют сетчатую структуру хроматина.
При исследовании морфологии клеток, похожих на вагинальные, учитывают наличие в них Х-хроматина. Учету подлежат только те клетки, в которых сохранилась структура ядра. При необходимости клетки в препаратах-отпечатках могут быть исследованы на наличие Y-хроматина. С этой целью можно окрасить флюорохромом весь препарат или только часть препарата, где расположены клетки, представляющие интерес для такого исследования.
В последнем случае все реактивы наносят последовательно по каплям на выбранный участок. После окраски препарат накрывают покровным стеклом и исследуют под люминесцентным микроскопом.
Как сделать мазок отпечаток
Стекло нужно хорошо промыть в проточной воде, а стекла, бывшие в употреблении, прокипятить в соде или еще лучше, по нашим наблюдениям,— в зольном щелоке. Прокипяченные в зольном щелоке стекла затем хорошо промывают в проточной воде, вытирают чистой сухой тряпочкой и помещают в смеси спирта с эфиром (в равных частях). Перед работой стекла вынимают с помощью пинцета и насухо вытирают чистым полотенцем. Лучшими стеклами являются приготовленные из фотопластинок, так как они не имеют пузырьков и поверхность их ровная и чистая.
В случае нужды можно использовать и старые стекла, бывшие в употреблении. После просмотра и браковки негодных стекол их подвергают тщательной обработке и очистке и после этого хранят в смеси спирта с эфиром.
Первую каплю крови удаляют ваткой, а из второй капли изготовляется мазок. Кровь необходимо использовать возможно быстрее, пока она не претерпела изменений И не потеряла своих фи-зических свойств. Быстронаступающее свертывание крови делает приготовление мазка совершенно невозможным.
Мазок крови нужно делать возможно быстрее и увереннее. При этом условии мазки получаются ровными, однородными и не имеют прерывистых линий (гармошка). При приготовлении мазка предметное стекло зажимается между большим и средним пальцами левой руки. В правой руке находится шлифованное покровное стекло. Капля крови снимается прикосновением поверхности предметного стекла. У беспокойных животных каплю крови можно снять углом покровного стекла, а затем перенести ее на предметное стекло. Для получения мазков хорошего качества необходимо брать небольшие капли крови.
Прислонив край покровного стекла к капле крови, которая находится на предметном стекле, дают возможность распределиться ей между двумя стеклами. Если стекла чистые и сухие, кровь, в силу капиллярности, распределяется почти моментально. Угол между покровным и предметным стеклом не должен превышать 45—50°. Покровное стекло фиксируется между пальцами правой руки так, чтобы кончик одного или обеих пальцев касался края предметного стекла. В этих случаях мазки получаются с ровными краями. Передвигая покровное стекло по предметному спокойно и не очень быстро, приготовляют мазок. Кровь при движении покровного стекла движется(тянется) за стеклом, а не впереди его, и не подвергается травмированию. Такие мазки называют «вытяжными», что дает довольно точное определение процесса их изготовления.
Приготовленный мазок необходимо сейчас же высушить. Летом это можно сделать, положив его в перевернутом виде на спичку. Переворачивание стекла мазком вниз необходимо делать потому, что летом мазки очень часто портятся мухами. При работе в сыром и холодном помещении мазки можно высушивать на руке, а затем убирать в боковой карман, прикрыв его предварительно чистым стеклом с целью сохранения мазка от повреждения.
Если изготовление мазков производится на морозе 10—15°, то для предотвращения гемолиза, когда они внесены в помещение, их нужно сразу же опустить в кювету с метиловым спиртом и в таком виде нести в теплое помещение.
После фиксации в спирте в течение 5—10 минут мазки окрашиваются обычным методом. Обработанные таким образом мазки ничем не отличаются от сделанных в сухом и теплом помещении и могут быть использованы для самых тонких гематологических исследований.
Просушивание мазков на пламени горелки не рекомендуется, так как форменные элементы крови деформируются и мазки становятся непригодными для исследования. Когда мазок высох, на нем пишется порядковый номер, кличка животного или номер, а также дата приготовления мазка.
Для окраски и исследования отбираются лучшие мазки. Хороший мазок должен отвечать следующим требованиям.
1. Он должен быть уже и короче стекла, т. е. должен иметь свободные края по длине и зазубренный край по ширине в конце мазка.
2. Края мазка должны быть ровными.
3. Мазок должен быть тонким, гомогенным, без просветов и прерываю щих линий, с нежной поверхностью и без следов гемолиза.
Рис. Правильно и неправильно приготовленные мазки: 1 — мазок на плохо обезжиренном стекле; 2 —слишком короткий мазок; 3 — слишком длинный неравномерный мазок; 4—слишком толстый мазок; 5—Правильный мазок, тонкий, равномерный и достаточно длинный.
При дальнейшем хранении препаратов необходимо оберегать их от насекомых, влаги, действия кислот и щелочей, дыма и различных газов. Плохо сохраняемые мазки становятся иногда совершенно непригодными для исследования, несмотря на качественное приготовление их вначале.
Фиксация мазков. Фиксация мазков преследует цель закрепить клетки крови в таком виде, чтобы форма и внутренняя структура их не изменялась. Большинство артефактов, обнаруживаемых при исследовании мазка крови, зависит от плохой фиксации. Лучшим фиксатором мазков является абсолютный метиловый спирт.
Спирт можно наслаивать непосредственно на мазок высоким слоем. Препарат в этом случае должен лежать горизонтально. Можно также опускать препарат в спирт, налитый в кюветы. В этом случае весь препарат погружается в спирт. Чтобы предотвратить улетучивание спирта, кювета закрывается крышкой или пробкой.
Фиксация метиловым спиртом производится в течение 3—5 минут. Спирт можно использовать для фиксации препаратов вторично, если он не загрязнен. Способ фиксации в кюветах удобен тем, что позволяет фиксировать одновременно четыре препарата.
Кроме метилового спирта, могут использоваться и другие фиксаторы:
3) алкоголь + эфир. 10 »
Неооходимо учитывать, что денатурированный спирт и 96° спирт дают очень много артефактов.
Специальной фиксации мазков не делают только в тех случаях, когда фиксирующие вещества входят в состав красок, например, при окраске по Май-Грюнвальду и Лейшману.
Фиксированные препараты сохраняются в течение продолжительного времени.
Мазок отпечаток
Мазок отпечаток – исследование, о котором, в отличие от стандартного мазка, слышали далеко не все. Сегодня этот способ диагностики активно применяется дерматовенерологами, гинекологами, урологами, онкологами. А также некоторыми другими специалистами.
Как проводится взятие мазков отпечатков, интересуются пациенты у своих лечащих врачей.
Какие есть разновидности этого анализа?
Как правильно подготовиться к взятию отпечатка и как проводится расшифровка?
Мазок отпечаток: что это за исследование
Многие пациенты часто интересуются о том, что это такое – исследование мазков отпечатков, и в чем особенности этого исследования. На самом деле исследование выполняется довольно просто. Все, что необходимо сделать – это приложить к предметному стеклу орган, который необходимо исследовать. Затем, когда отпечаток будет получен, окрашивают полученный материал специальным раствором и изучают с помощью микроскопа.
Интересно, что мазки отпечатки применяют не только для постановки диагнозов в медицинской сфере. Их широко применяют в судебно-медицинской экспертизе, микробиологии, патологической анатомии. Широко применяться подобное исследование стало только в последние годы. Да и то до сих пор далеко не все пациенты знают, что подразумевается под этим анализом.
Как правильно подготовиться к нему и какие бывают разновидности обследования.
Разновидности мазка отпечатка
Сегодня выделяют несколько вариантов забора мазка отпечатка. Пациенты спрашивают у своих врачей, какие есть разновидности исследования.
Исследование может быть применено, чтобы диагностировать различные инфекции на половых органах. Его выполнение рекомендуется при различных подозрениях на инфекционные процессы как специфического, так и неспецифического типа. Исследование с язвы может выполняться, например, при подозрении на сифилис. При этой патологии на половом органе, особенно у мужчин появляется неприятная, болезненная язва. С нее и берется отпечаток, чтобы потом при темнопольной микроскопии обнаружить бледных трепонем.
Еще один вариант диагностики – это обнаружение заражения герпесом. Особенно он эффективен после того, как образуются эрозии после прорыва папул.
Отпечаток рекомендуется выполнять мужчинам, которые страдают от неспецифических инфекций. Особенно часто его стоит проводить при баланопостите или баланите. С помощью исследования можно выявить неспецифичные патогены, такие как кокковая палочка, кишечная палочка, грибки.
Женщинам рекомендуют сдавать анализ в том случае, если у них есть эрозия на шейке матки. Это необходимо чтобы убедиться, что в органе нет признаков злокачественного перерождения. Если такие признаки обнаруживаются, представительнице прекрасного пола рекомендуется обратиться к онкологу.
Показания к выполнению мазка отпечатка
Мазок отпечаток головки, с шейки матки или иных частей может выполняться по различным показаниям. Чаще всего врач направляет пациента на это исследование в том случае, если есть подозрение на инфекционный процесс.
Симптомы, с которыми больной может получить направление на анализ, следующие:
Помимо инфекций пациенту могут рекомендовать поход к врачу для сдачи анализов. В том случае, если есть подозрение на злокачественный процесс.
Такое исследование называется цитологией и призвано показывать злокачественно-измененные клетки. Дополнительно рекомендуется проводить диагностику, если есть подозрение на заражение паразитами. Или тогда, когда необходимо провести диагностику дерматологических патологий.
Мазок отпечаток: особенности забора материала
Всем хорошо известно, что мазок из уретры – болезненная процедура для представителей сильного пола. У женщин эта процедура проходит несколько легче, но все равно неприятна. Мазок отпечаток отличается от мазка из уретры полной безболезненностью выполнения.
Правда, к сожалению, показания для выполнения этих процедур не одинаковы, а потому заменить одну другой чаще всего нельзя.
Техника выполнения очень проста. Мужчину просят раздеться ниже пояса. Затем с помощью специальной щеточки собирают биологический материал. Особенно важно собрать достаточное количество материала, но при этом не переборщить.
Если материала будет недостаточно, нельзя будет получить хоть какие-то результаты. Избыток же биоматериала может привести к получению ложноположительных или ложноотрицательных результатов.
Полученный с помощью щеточки биологический материал наносят на предметное стекло. И закрепляют специальными методами для исследования с помощью микроскопа. Либо помещают в специальную пробирку.
Пробирку или стекло направляют в лабораторию, где проводятся дальнейшие исследования по необходимости. В качестве аналогии забора материала щеточкой можно приложить половой член к предметному стеклу или аккуратно собрать предметным стеклом выделения. Но, как считают врачи, использование щеточки – более правильный вариант.
Как готовятся мазки отпечатки
Приготовление мазка отпечатка – задача, которую должен выполнять грамотный врач или лаборант. Дело в том, что мало просто нанести биологический материал на предметное стекло. Его необходимо еще и правильно зафиксировать.
Если биоматериал не будет зафиксирован, то исследовать его с высокой степенью достоверности не удастся. Для окраски могут использоваться различные красители. Чаще всего применяют окраску по Граму. С ее помощью выявляют нормальную и патологическую микрофлору, которая может наносить пациенту вред.
Мазок отпечаток: базовые правила подготовки
Ни мужчине, ни женщине нельзя прийти на обследование и сразу получить достоверные результаты, сдав анализ просто так. Необходимо провести минимальную подготовку, которая позволит получить достоверные данные.
Если подготовка будет проводиться правильно, то результаты удастся получить наиболее точные и достоверные. Если же пациент нарушит рекомендации, велика вероятность того, что ему придется проходить диагностическое исследование повторно. Так как врач сможет поставить их достоверность под сомнение.
Расшифровка результатов мазка отпечатка
Расшифровка результатов мазка отпечатка должна проводиться врачом. Только медицинский работник сможет достоверно оценить результаты. Ориентируясь не только на то, что написано в справке, но и на то, как себя ощущает пациент. По сути, только благодаря врачу можно отделить достоверные результаты от ложноположительных и ложноотрицательных.
При оценке результатов в первую очередь обращают внимание на:
Пациентам не рекомендуется самостоятельно проводить расшифровку анализов даже в том случае, если кажется, что сделать это можно легко. Необходимо принести полученные результаты врачу. Чтобы он оценил итоги и, опираясь на них и объективные данные от исследования, мог поставить точный диагноз.
Мазок отпечаток: что делать, если результаты плохие
Если результаты мазка отпечатка оказались плохими, в первую очередь пациент не должен впадать в панику. Необходимо, посетив врача, получить от него направление на повторный анализ. При положительных результатах необходимо обязательно перепроверять итоги.
Чтобы исключить ложноположительные варианты поставки диагноза. Далее, после того как будут получены повторные результаты, если они все еще положительны, нужно обратиться к врачу.
Медицинский работник сможет:
Если у пациента выявлены инфекции, передающиеся половым путем, это может грозить нарушением репродуктивной функции. Именно бесплодие в основном заставляет людей обращаться к врачу для проведения диагностики. В которую, в том числе, может входить и выполнение мазка отпечатка.
Часто пациенты интересуются, где можно сдать цитологию мазка отпечатка или пройти альтернативу этому исследованию. Обратиться можно как в государственный кожно-венерологический диспансер, так и в частную клинику при необходимости. Сдать биоматериал на исследование можно на бесплатной основе. Если проходить диагностику по месту жительства по рекомендации врача. Также и платно.
Сдача мазка отпечатка – это хороший диагностический метод, позволяющий поставить диагноз во многих случаях. Если же этого подхода будет недостаточно для определения болезни, врач сможет после оценки результатов подобрать наиболее оптимальные варианты уточняющей диагностики. А затем выбрать способы терапии, которые дадут положительный эффект, а также проконтролировать ход лечения.
При необходимости сделать мазок отпечаток обращайтесь к грамотным венерологам и гинекологам.